摘要: 肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，占我国恶性肿瘤死亡率的第二位。尽管通过手术、化疗和放疗等可取得一定的疗效，但对于多数中、晚期患者，其效果仍不能令人满意。近年来，人们研究的热点集中到肝癌的基因治疗上，试图从分子水平寻找一种更有效的治疗方... 展开 肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，占我国恶性肿瘤死亡率的第二位。尽管通过手术、化疗和放疗等可取得一定的疗效，但对于多数中、晚期患者，其效果仍不能令人满意。近年来，人们研究的热点集中到肝癌的基因治疗上，试图从分子水平寻找一种更有效的治疗方法。 PTEN(也称MMAC1或TEP1)基因是近年来发现的一种新的抑癌基因，该基因定位于10q23上，它是至今发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，对细胞的生长、增殖、分化、凋亡、黏附、迁移和血管生长等许多生物学行为有重要作用。现已证实该基因的突变、失活与多种肿瘤的发生、发展密切相关，成为继P16，P27后又一有重要意义的抑癌基因。 体外研究表明，外源性PTEN基因可使缺乏功能性PTEN产物的肿瘤细胞生长抑制。本研究的目的：克隆人抑癌基因PTEN全长cDNA，构建其真核表达载体，并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法：(1)采用RT-PCR法从人正常肝组织中扩增PTEN全长cDNA。(2)将之与pMD18-T Simple Vector连接，测序，获得PTEN基因。(3)将该基因与pcDNA3.1(+)载体连接，构建pcDNA3.1-PTEN真核表达载体。(4)用该载体转染HepG2细胞，RT-PCR和免疫印记杂交法(Western Blotting)检测PTEN的表达，并用MTT法比较观察了PTEN基因对HepG2细胞生长的影响。结果：酶切和测序证实PTEN基因克隆和真核表达载体构建成功。HepG2-PTEN细胞中PTEN mRNA和蛋白的表达均显著高于未转染的HepG2细胞，并且HepG2-PTEN细胞的生长受到明显抑制。结论：人抑癌基因PTEN在人肝癌细胞系 HepG2 细胞中能够高效、稳定地表达并能抑制细胞的生长，为其在肝癌基因治疗研究中的应用奠定了基础。 收起