摘要: 目的：构建转基因小鼠模型的载体，检测载体表达盒的可行性，所携带fat-1基因在真核细胞（人肝癌HepG2细胞）的表达、以及功能发挥情况（对细胞增殖、凋亡以及细胞周期中所起的作用），鉴定出转基因小鼠载体的合适性。 方法：将n-3多不饱和脂肪酸脱... 展开 目的：构建转基因小鼠模型的载体，检测载体表达盒的可行性，所携带fat-1基因在真核细胞（人肝癌HepG2细胞）的表达、以及功能发挥情况（对细胞增殖、凋亡以及细胞周期中所起的作用），鉴定出转基因小鼠载体的合适性。 方法：将n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1的cDNA插入到真核表达载体(pcDNA3.1(+)myc-His A)中，构建重组表达载体pcDNA3.1(+)Inyc-His A-fat-1，用脂质体介导的方法转染到人肝癌HepG2细胞中，RT-PCR检测fat-1基因的表达，MTT法分析fat-1基因对HepG2细胞增殖的影响，气相色谱分析检测fat-1基因对HepG2细胞n-6/n-3多聚不饱和脂肪酸(PUFAs)比例的影响，流式细胞术检测fat-1基因对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。 结果：成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)nyc-His A-fat-1，所携带的fat-1基因能在HepG2细胞内有效异源表达，48h后可检测到fat-1 mRMA的条带。与对照细胞相比，fat-1基因有效地抑制了人肝癌细胞HepG2细胞的增殖(70%，p<0.01)，促进了凋亡，细胞增殖主要被阻滞在G0/G1期；同时降低了人肝癌细胞n-6/ n-3 PUFAs比例。这说明fatl基因很好地发挥了功能。 结论：所构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)myc-His A-fat-1可以作为真核细胞内表达系统。所携带的fat-1基因功能发挥正常：能降低人肝癌HepG2细胞n-6/ n-3PUFAs比例，并通过一定机制促进大多数HepG2细胞在G0/ G1期凋亡，抑制了其增殖。pcDNA3.1(+)myc-His A-fat-1重组载体可以作为下一步转基因小鼠的合适载体。 收起