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摘要 : 目的：CorneliadeLange综合征（Cdls）为基因缺陷性疾病，多认为NIPBL基因突变可引起Cdls。NIPBL基因的突变可能对其调控的相关Shh、Wnt5a基因转录发生变化，从而对Wnt信号通路中关键因子功能产生影响，从而改变了成骨细胞的分化的方向等，最终导致长... 展开目的：CorneliadeLange综合征（Cdls）为基因缺陷性疾病，多认为NIPBL基因突变可引起Cdls。NIPBL基因的突变可能对其调控的相关Shh、Wnt5a基因转录发生变化，从而对Wnt信号通路中关键因子功能产生影响，从而改变了成骨细胞的分化的方向等，最终导致长骨发育异常。因此，本研究以小鼠胚胎肢芽组织为研究对象，研究Shh、Wnt5a基因在NIPBL基因缺陷小鼠肢芽的表达情况，揭示Wnt信号通路相关因子在NIPBL+/-基因敲除小鼠中的作用，探讨两个基因与Cdls综合征的关系，从而为Cdls综合征的发病机制提供相关理论依据。方法：选择实验动物为NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠的背景品系小鼠，57BL/6J，SPF级，购于浙江大学动物实验中心，动物饲养于石河子大学药学院动物实验中心，饲养条件平均温度25℃，湿度40%左右。NIPBL+/-小鼠，雄性体重35g，雌性体重30g，20：00时将雌雄小鼠按2∶1合笼，晨8:00检查雌鼠的阴栓，阳性阴栓小鼠当天12:00作为其胚胎0.5天。分别于胚胎10天、11天、12天取胎鼠进行实验验证。实验组，利用RT-PCR逆转录试剂盒鉴定后，可得到36只NIPBL+/-胎鼠肢芽，10天（n=12）、11天（n=12）、12天（n=12）。对照组，利用RT-PCR逆转录试剂盒鉴定，可得到36只NIPBL+/+胎鼠肢芽，10天（n=12）、11天（n=12）、12天（n=12），将胎鼠肢芽组织放入液氮中，15-20min后，取出肢芽组织将其冷冻保存于-80℃冰箱内，备用。real-timePCR检测Shh、Wnt5a基因转录及表达水平。实验数据均为正态分布，均数±标准差（-用单因素方差分析，且各组数据间Pearson相关分析，P＜0.05有统计学差异，P＜0.01有显著差异。(x)±s）表示，经SPSS17.0统计软件分析，各组比较均采结果：通过NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠获得NIPBL+/-小鼠模型，然后NIPBL+/-小鼠杂交，通过RT-PCR鉴定出实验组胎鼠及对照组胎鼠。利用real-timePCR检测Shh、Wnt5a基因转录水平，实验组Shh、Wnt5a的表达术后第10d开始升高，第11d达到最大值，第12d有下降。实验组各时间点与对照组各时间点比较，基因表达量较对照组表达量低，差异有统计学意义（P＜0.01），组内各不同时间段之间比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）。利用Westernblot检测Shh、Wnt5a蛋白表达水平，实验组Shh、Wnt5a的表达术后第10d开始升高，第11d达到最大值，第12d有下降，实验组各时间点与对照组各时间点比较，基因表达量较对照组表达量低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：通过检测NIPBL+/-基因敲除胎鼠肢芽中Shh及Wnt5a基因的表达发现在孕鼠第10、11、12天两基因表达受到抑制，说明NIPBL对Wnt5a和Shh基因表达有影响，有助于人们更好的了解NIPBL+/-基因缺陷引起CdLs综合征骨畸形的发病机制。收起

关键词 : 基因缺陷性疾病 Shh基因 Wnt5a基因 NIPBL+/-动物模型肢芽表达

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