摘要: 目的：将对没食子酸(gallic acid,GA)致HepaRG肝细胞毒性的机制进行研究,阐明其产生内质网应激的具体通路,为何首乌中致肝损伤成分提供深入全面的探索基础和参考. 方法：采用CCK-8的方法检测GA对HepaRG细胞活率的影响,同时检测给予没食子酸后HepaR... 展开 目的：将对没食子酸(gallic acid,GA)致HepaRG肝细胞毒性的机制进行研究,阐明其产生内质网应激的具体通路,为何首乌中致肝损伤成分提供深入全面的探索基础和参考. 方法：采用CCK-8的方法检测GA对HepaRG细胞活率的影响,同时检测给予没食子酸后HepaRG细胞内ATP和LDH的水平.高内涵方法检测GA诱导HepaRG肝细胞内质网.Western Blot和Real Time PCR方法检测内质网应激通路中关键的蛋白和目的基因,流式细胞仪检测GA处理后HepaRG的凋亡率.探索加入内质网应激通路抑制剂Salubrinal后,对内质网应激的影响以及细胞损伤的改善情况. 结果：随着没食子酸给药浓度的增加:200μM,400μM,600μM,800μM,1000μM,细胞活率逐渐下降,细胞内ATP含量逐渐下降,LDH释放率逐渐升高,24h的IC50为453μM;高内涵结果为GA处理24h后,浓度从300μM开始时,细胞内质网荧光强度下降与对照组相比有显著差异(P＜0.05);Western Blot和Real Time PCR结果显示为不同浓度没食子酸处理24h后,内质网应激分子伴侣GRP78显著升高,PERK通路蛋白P-eIF2α,ATF-4均显著升高,CHOP和Caspase-12的表达随着给药浓度升高逐渐上升,加入内质网应激抑制剂Salubrinal干预后,减轻了没食子酸对HepaRG的损伤:细胞活率与给药组相比显著升高,显著降低GA处理HepaRG细胞的凋亡率.其机制可能与下调CHOP和Caspase-12的表达有关. 结论：没食子酸能引起HepaRG肝细胞内质网应激,其激活了PERK通路,诱导P-eIF2α,ATF4,CHOP,caspase-12分子高表达,并诱导其凋亡.内质网应激抑制剂Salubrinal可以减轻这种损伤. 收起