摘要: SpyTag/SpyCatcher是一种经异构肽键连接的分子环化技术,共价结合的异构肽键具有很强的化学稳定性和耐高温特性.本研究对枯草芽孢杆菌、褐色高温单孢菌来源的β-甘露聚糖酶基因(BS3)MAN和木聚糖酶基因TFX进行分子环化,构建工程菌,诱导表达蛋白,并研究其... 展开 SpyTag/SpyCatcher是一种经异构肽键连接的分子环化技术,共价结合的异构肽键具有很强的化学稳定性和耐高温特性.本研究对枯草芽孢杆菌、褐色高温单孢菌来源的β-甘露聚糖酶基因(BS3)MAN和木聚糖酶基因TFX进行分子环化,构建工程菌,诱导表达蛋白,并研究其酶学性质.结果表明:在70℃下处理10min,线性蛋白L-MAN残余活性为72.00％,环化蛋白C-MAN和Sn-MAN残余活性分别为97.49％和97.26％,较之线性蛋白,都提高了1.35倍;TFX在80℃下处理10min,环化蛋白C-TFX的残余活性(80.14％)为性线性蛋白L-TFX(41.49％)的1.93倍,且抗聚沉能力都显著提高.结构分析显示,环化蛋白在高温条件下更能维持其构象稳定.异肽键介导的分子环化提高了蛋白稳定性,为提升工业酶的热稳定性、扩大其应用范围建立了良好基础. 收起