摘要: 目的：本研究以自体回输细胞治疗产品EAL为研究对象,通过小鼠体内实验,研究EAL的生物分布、致瘤性和重复给药毒性,综合评价EAL的安全性,为其临床实验提供数据支持,初步探讨细胞治疗产品的安全性评价研究方法. 方法：1.生物分布研究：1)活体成像检测... 展开 目的：本研究以自体回输细胞治疗产品EAL为研究对象,通过小鼠体内实验,研究EAL的生物分布、致瘤性和重复给药毒性,综合评价EAL的安全性,为其临床实验提供数据支持,初步探讨细胞治疗产品的安全性评价研究方法. 方法：1.生物分布研究：1)活体成像检测：采用C57BL/6小鼠,分别尾静脉注射给予生理盐水和DiR标记的EAL细胞,于3h、1、3、6、9、15、21天麻醉动物后进行活体成像,检测DiR标记的细胞在小鼠体内的分布;2)流式细胞仪检测：采用C57BL/6小鼠,分别静脉注射给予非转基因鼠源的EAL细胞和给予GFP转基因鼠源的EAL细胞,于3h、1、3、6、9、15、21天麻醉动物后解剖取外周血、淋巴结、胸腺、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、骨髓,流式细胞仪检测GFP+EAL细胞在上述组织器官中所占比例及分布数量.2.致瘤性研究：采用BALB/c裸鼠,分为阴性对照组、阳性对照组(给予Hela细胞)、EAL低剂量(1×107cells/只)及EAL高剂量(5×107cells/只)组,皮下给药1次,观察裸鼠注射部位有无结节或肿物形成,并通过病理学检查确认是否有肿瘤形成.3.重复给药毒性研宄采用C57BL/6小鼠,分为阴性对照组、溶媒对照组、低剂量(1.5×106cells/只)及高剂量(1×107cells/只)组,静脉注射给药,每周1次,共17次,检测指标包括临床症状、体重、摄食量、血清生化、血液学、外周血T淋巴细胞亚群分布和病理学检查等,考察小鼠产生的毒性反应及其严重程度,主要毒性靶器官及损害的可逆程度. 结果：1.活体成像检测到EAL首先分布于肺脏、肝脏，之后在脾脏中也有较多分布，随时间延长荧光强度逐渐变弱，于15天后基本消失。流式细胞仪检测到EAL首先在肝脏中分布比例最高(10.59%)，随之逐渐降低，于第21天降至0.52%;肺脏和脾脏在第一天达到最大值(肺脏3.37%和脾脏1.68%)，之后逐渐减低，到给药21天后分别降至0.22%和0.36%;肾脏、骨髓和胸腺中的EAL在各检测时间点均维持较低水平。 2.BALB/c裸鼠阳性组成瘤率100%，而EAL低剂量组及EAL高剂量组临床症状观察和组织病理学检测均未见肿瘤样病变。3.C57BL/6小鼠重复给药17次，实验期间动物未见与给予供试品相关的异常临床症状，但长期给药可能会使体重增加(P<0.05)和摄食量的增加(P<0.05)，给药组个别时间点γ-干扰素水平升高，其他检测指标未见明显改变。 结论：通过近红外染料DiR标记EAL细胞，用活体成像的方法可以简便快速地检测给药后细胞在小鼠体内的分布活体成像与流式细胞仪两种检测方法结果大体一致致瘤性研究表明BALB/c裸鼠皮下注射EAL细胞不具有致瘤性；重复给药毒性研究中，动物的体重、摄食量及血清IFN-γ水平有所增加，临床症状、注射部位、血液学、血清生化、外周血T淋巴细胞表型均未见与供试品相关的明显改变。 收起