摘要: 目的：建立一种光致敏体外评价方法(光h-CLAT方法),评价方法的灵敏度和特异性,进行方法验证. 方法：应用多种化合物(包括光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂、阴性化合物),通过预实验确定适当给药浓度,建立THP-1细胞光致敏模型及多种其它... 展开 目的：建立一种光致敏体外评价方法(光h-CLAT方法),评价方法的灵敏度和特异性,进行方法验证. 方法：应用多种化合物(包括光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂、阴性化合物),通过预实验确定适当给药浓度,建立THP-1细胞光致敏模型及多种其它对照模型.在细胞与化合物孵育后进行紫外照射,用流式细胞术测定细胞表面生物标志物CD86、CD54的变化、Luminex方法检测细胞多种Th1和Th2型细胞因子(GM-CSF、INF-y、IL-12P40、IL-12P70、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IL-12、IL-13、IL-18)的变化,测定细胞周期变化,筛选光致敏评价相关指标. 结果：THP-1细胞在与光致敏剂孵育及紫外照射后，CD54表达显著增加、细胞分泌IL-8和TNF-α显著增加，其中IL-8的增加最为明显，具有较好的灵敏度，而未照射条件下前述指标没有明显变化。皮肤致敏剂模型DNCB和CHD在非照射条件下即可引起CD54表达及IL-8和TNF-α分泌的显著变化，在紫外照射后未引起进一步变化。光刺激剂模型在经过预照射处理后，前述指标的变化特征与光致敏模型不同。皮肤刺激剂和阴性对照未见前述指标发生明显变化。该方法能够对光致敏剂、皮肤致敏剂、光刺激剂、皮肤刺激剂进行较好区分，具有较好的特异性。多次重复试验结果显示本方法具有较好的重复性和稳定性。本研究中光致敏模型CD86表达的变化不明显，检测的其它细胞因子未见显著的变化。细胞周期检测显示光致敏模型S期和4N期细胞占细胞总数的百分比显著增加，提示细胞DNA合成和分裂增加、增殖明显。 结论：光h-CLAT方法在光致敏检测中具有较好的灵敏度和特异性，细胞表面标志物CD54、细胞因子IL-8是评价化合物光致敏性的较好指标，后续研究中可进一步扩大模型进行验证。 收起