摘要: 目的:原核表达并纯化流感嗜血杆菌外膜蛋白P6和PD,获高纯度的抗原用于抗体制备,为其MAP候选疫苗的研究作前期探索.方法:抽提流感嗜血杆菌标准株a,b,c,d,e,f和不定型菌株DNA,PCR扩增外膜蛋白P6和PD基因pal、glpQ,将其克隆至pMD-18T质粒,转化入E.coli D... 展开 目的:原核表达并纯化流感嗜血杆菌外膜蛋白P6和PD,获高纯度的抗原用于抗体制备,为其MAP候选疫苗的研究作前期探索.方法:抽提流感嗜血杆菌标准株a,b,c,d,e,f和不定型菌株DNA,PCR扩增外膜蛋白P6和PD基因pal、glpQ,将其克隆至pMD-18T质粒,转化入E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒,酶切鉴定后序列分析.结果:;与GenBank中流感嗜血杆菌pal、glpQ基因比较,本实验所克隆的流感嗜血杆菌各型菌株pal、gpQ基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6％、98.9％以上.在IPTG诱导下,所构建的原核表达系统E.coli BL21 DE3pET42a-pal、B L21 DE3pET42a-glpQ能有效表达rP6、rPD蛋白,该重组蛋白主要以可溶性形式存在.结论:流感嗜血杆菌各型菌株外膜蛋白P6和PD高度保守,本研究构建的原核表达系统能有效表达可溶性rP6、rPD蛋白. 收起