摘要: 目的：构建抗CD25嵌合抗体的真核表达载体并在293T细胞中进行瞬时表达。 方法：使用RT-PCR法，设计针对信号肽的简并引物钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因，以质粒PAG4622为模板钓取人抗体IgG1重、轻链恒定区基因，分别将重、轻链可变区基... 展开 目的：构建抗CD25嵌合抗体的真核表达载体并在293T细胞中进行瞬时表达。 方法：使用RT-PCR法，设计针对信号肽的简并引物钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因，以质粒PAG4622为模板钓取人抗体IgG1重、轻链恒定区基因，分别将重、轻链可变区基因与相应恒定区基因进行拼接，将完整的重、轻链嵌合基因分别与真核表达载体pOptiVEC和pcDNA3.3连接，构建抗CD25的人鼠嵌合基因真核表达载体。将嵌合基因表达载体通过脂质体法共转染293T细胞中进行表达。通过RT-PCR检测mRNA的转录，夹心ELISA检测抗体表达量，流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合特异性。 结果：正确构建了抗CD25人鼠嵌合抗体真核表达载体，在293T细胞中进行瞬时表达，RT—PCR显示抗体基因在细胞中进行了成功的转录，ELISA测定抗体表达量在10-20ng/ml，FCM检测其能特异性与IL-2R结合。 结论：成功实现了抗CD25人鼠嵌合抗体在真核细胞中的瞬时表达。 收起