摘要: 利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET3... 展开 利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切和测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1mM的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的抗原反应活性,为以重组HA蛋白作为抗原建立检测H1N1亚型猪流感病毒血清学抗体水平奠定了基础. 收起