摘要: 南瓜（Cucurbita L.）是重要的瓜类蔬菜，具有丰富的营养价值。为了检测南瓜在胁迫下功能基因的表达水平，首先要筛选出在各种胁迫下表达水平相对稳定的内参基因。本研究利用实验室已测序得到的南瓜转录组数据，运用qRT-PCR技术来筛选合适的内参基因，... 展开 南瓜（Cucurbita L.）是重要的瓜类蔬菜，具有丰富的营养价值。为了检测南瓜在胁迫下功能基因的表达水平，首先要筛选出在各种胁迫下表达水平相对稳定的内参基因。本研究利用实验室已测序得到的南瓜转录组数据，运用qRT-PCR技术来筛选合适的内参基因，分析了不同胁迫下C AT家族基因成员表达特性，研究C AT家族基因对逆境应答的差异。研究结果为今后深入开展南瓜相关分子生物学研究奠定基础。 1、南瓜内参基因筛选。从转录组数据中挖掘出10个新候选内参基因，以及前人报道的2个传统内参基因（CAC，EF-1A），利用qRT-PCR技术对这12个候选内参基因在两个南瓜品种（C13-3、C13-84）不同组织部位，以及非生物胁迫（盐、低温、干旱）、生物胁迫（果斑病、西瓜枯萎病、甜瓜枯萎病、根腐病）、激素处理（ GA3、ABA、NAA、ETH）下，共60个样本的表达模式进行测定，对12个候选基因的稳定性进行评估，采用geNorm计算最佳内参组合为Unigene16959和CL5002.Contig7，采用NormFinder计算的最佳内参为CL5547.Contig2。通过干旱胁迫下catalase（CAT）基因的表达水平鉴定单个内参和组合内参的稳定性，并用传统内参EF-1A作为对照，结果表明采用上述2个或3个内参组合对目标基因的相对表达水平的校正更为准确。传统内参EF-1A表达量过高，不适合作为南瓜内参基因。 2、南瓜不同胁迫处理下C AT家族基因成员的表达分析。测定了在非生物胁迫、生物胁迫、激素处理下，叶片中H2O2的含量以及CAT1、CAT2、CAT3转录水平的表达情况。结果表明：C AT基因对以上胁迫均有一定的应答关系，C AT基因受胁迫诱导表达量增加，但在不同的胁迫下，表达增加的程度、趋势以及达到最大表达量的时间存在差异。在所有的胁迫处理中，CAT1、CAT2的表达变化较大，CAT3的表达则没有明显的变化。在过氧化氢含量增加时，CAT1、CAT2表达上调，表明南瓜叶片中参与抗氧化胁迫的CAT家族基因主要是CAT1和CAT2，H2O2作为信号分子，在转录水平上启动CAT家族基因的表达，使过氧化氢酶活性增强，分解过多的H2O2，维持南瓜体内氧化还原保持稳定状态。 收起