摘要: 凝集素能识别外源颗粒，如微藻和致病菌，在无脊椎动物中参与免疫识别、细胞吞噬和免疫清除等生理过程。本文以我国重要的滩涂养殖贝类缢蛏（Sinonovaculaconstricta）为研究对象，克隆了缢蛏C型凝集素（ScCL）和半乳糖凝集素（ScGL），并对它们的mRN... 展开 凝集素能识别外源颗粒，如微藻和致病菌，在无脊椎动物中参与免疫识别、细胞吞噬和免疫清除等生理过程。本文以我国重要的滩涂养殖贝类缢蛏（Sinonovaculaconstricta）为研究对象，克隆了缢蛏C型凝集素（ScCL）和半乳糖凝集素（ScGL），并对它们的mRNA表达模式和功能进行了研究。 1.利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆了半乳糖凝集素（ScGL），全长为1282bp，开放阅读框（ORF）为918bp。ScGL具有2个碳水化合物识别结构域（CRD）。氨基酸序列比对显示，ScGL与菲律宾蛤仔（Venerupisphilippinarum）的半乳糖凝集素相似性较高（65%），与已报道的2个缢蛏半乳糖凝集素相似性较低，分别为39.74%和44.76%。进化树构建显示，ScGL与菲律宾蛤仔半乳糖凝集素聚为一支。重组表达发现ScGL在包涵体表达，分子量约34.4kDa。组织表达规律显示，ScGL在缢蛏鳃、血细胞、肠、唇瓣、外套膜、出水管、入水管、足和消化腺中均表达，其中肠、内脏团、唇瓣和足中表达量较高，出水管和入水管中表达量最低。摄食试验显示，鳃组织ScGL表达对小球藻（Chlorellavulgaris）和假微型海链藻（Thalassiosirapseudonana）均有显著响应，说明ScGL可能参与了缢蛏对微藻的识别和选择。消化腺ScGL表达量分别在金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）感染后3和48h显著高于对照组；鳃ScGL表达量分别在鳗弧菌（Vibrioharveyi）和金黄色葡萄球菌感染后6和48h显著高于对照组，说明ScGL参与了病原菌诱导的缢蛏免疫应答。 2.利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆了C型凝集素（ScCL），全长为1645bp，ORF为822bp。ScCL具有1个CRD。氨基酸序列比对显示，ScCL与大竹蛏（Solengrandis）的C型凝集素相似性较高（69.77％），与已报道的2个缢蛏C型凝集素相似性较低，分别为24.80%和23.02%。进化树构建显示，ScCL与大竹蛏C型凝集素聚为一支。重组表达发现ScCL在包涵体表达，分子量约31.7kDa。组织表达规律显示，ScCL在缢蛏鳃、血细胞、肠、唇瓣、外套膜、出水管、入水管、足和消化腺中均表达，其中在足中表达量最高。摄食试验显示，鳃组织ScCL表达对小球藻和假微型海链藻均有显著响应，说明ScCL可能参与了缢蛏对微藻的识别和选择。鳃ScCL表达对金黄色葡萄球菌有显著响应，说明ScCL参与了病原菌诱导的缢蛏免疫应答。通过对ScCL功能和特性进一步分析发现，ScCL的凝集活性不依赖Ca2+。凝集试验显示，ScCL能凝集假微型海链藻、小球藻、角毛藻（Chaetocerossp.）、亚心形扁藻（Platymonassubcordiformis）和微拟球藻（Nannochloropsissp.），不凝集湛江等鞭金藻（Isochrysiszhanjiangensis）；ScCL也能凝集金黄色葡萄球菌和哈维氏弧菌（Vibrioanguillarum），不凝集鳗弧菌、副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）和蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）。结合试验显示，ScCL能结合金黄色葡萄球菌和哈维氏弧菌，不能结合鳗弧菌、副溶血弧菌和蜡样芽孢杆菌。此外，ScCL可以与LPS、LTA和甘露糖结合，不能与PGN结合，且ScCL对LPS和甘露糖的结合能力比LTA强。本研究为深入探究缢蛏C型凝集素和半乳糖凝集素在摄食和免疫中的作用奠定了理论基础。 收起