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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 目的:动脉粥样硬化发生发展与心脑血管疾病的发生密切相关。我们在前期研究中发现内皮细胞中高表达的microRNA-221/222能通过抑制转录因子ETS-1的表达进而减轻AngII诱导的内皮细胞炎症反应,而炎症的病理过程贯穿于动脉粥样硬化全过程,因此本课题我... 展开 目的:动脉粥样硬化发生发展与心脑血管疾病的发生密切相关。我们在前期研究中发现内皮细胞中高表达的microRNA-221/222能通过抑制转录因子ETS-1的表达进而减轻AngII诱导的内皮细胞炎症反应,而炎症的病理过程贯穿于动脉粥样硬化全过程,因此本课题我们在体分析了microRNAs在动脉粥样硬化斑块中的表达及功能。采用硅胶套管植入法制作 ApoE-/-小鼠颈总动脉斑块快速形成模型,并通过实时荧光定量 PCR技术对心血管疾病相关的 microRNA-125b、microRNA-221、microRNA-156、microRNA-23a、microRNA-22及其靶基因在对照和模型小鼠颈总动脉组织中的差异表达进行了检测,以期能够进一步阐明MicroRNA在动脉粥样硬化斑块增殖和炎症反应中的作用。 方法:⑴动脉粥样硬化小鼠模型的建立:在10-12周龄小鼠颈部,利用硅胶套管内径小于血管内径的方式,通过手术方式,在其颈总动脉固定一5mm长的硅胶套管,缩窄颈总动脉。小鼠经高脂饲料喂养16周后,观察颈动脉血管变化,并通过苏木素-伊红染色、油红O染色进行组织学分析,检测动脉粥样硬化的发生情况。⑵病理组织切片:苏木素-伊红染色法、油红O染色法制作病理组织切片,对比血管内壁病理学差异改变。⑶基因芯片技术检测动脉粥样硬化中的microRNAs表达。⑷荧光定量PCR技术:实时荧光定量PCR检测血管斑块中microRNAs的表达。 结果:ApoE-/-小鼠颈总动脉缩窄手术后,高脂饮食喂养16周后,麻醉,切开颈部皮肤,显露颈总动脉,于颈总动脉套管处可见呈黄色的动脉粥样硬化斑块遍及血管腔内。血管组织固定、脱水后,经油红O染色,可见血管内皮细胞下有大量大小不等的泡沫细胞,炎性细胞,纤维肉芽组织等,血管管腔内可伴有出血、脂质沉积。通过基因芯片对 microRNAs表达进行检测,显示microRNA-23,microRNA-142-5p等在动脉粥样硬化的 Apo-E-/-小鼠血管组织含量明显高于普通C57小鼠的血管组织含量。实时荧光定量PCR对动脉粥样硬化斑块中microRNAs进行表达检测,显示实验组与对照组的血管组织中,其中MicroRNA23在实验组动物血管组织中的表达量(2.74±0.37),明显高于在对照组中(1±0.22),其中实验组P﹤0.05,对照组P﹤0.01,n=6,表明MicroRNA23表达量明显高于对照组,且microRNA-23a的表达量是对照组的3倍。与基因芯片结果相一致。 结论:本工作发现在小鼠动脉粥样模型中,多种microRNAs的表达异常。其中以MicroRNA-23在Apo-E-/-动脉粥样硬化小鼠模型的血管组织中表达量出现了成倍升高,尤其是microRNA-23的结果与基因芯片结果相一致,提示microRNA-23可能参与了动脉粥样硬化疾病的发生和发展过程。 收起
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