摘要: DKK1是经典 wnt信号通路的拮抗剂。它可以与 Lrp5/6受体结合,对 wnt信号通路产生竞争性抑制作用。此外DKK1还能够与亲和受体Kremen及Lrp6受体结合,诱导产生内吞作用,从而减少细胞膜表面 Lrp6受体的数量。DKK1能够在肺癌中特异性、高水平表达。DKK1主要... 展开 DKK1是经典 wnt信号通路的拮抗剂。它可以与 Lrp5/6受体结合,对 wnt信号通路产生竞争性抑制作用。此外DKK1还能够与亲和受体Kremen及Lrp6受体结合,诱导产生内吞作用,从而减少细胞膜表面 Lrp6受体的数量。DKK1能够在肺癌中特异性、高水平表达。DKK1主要在胚胎组织中表达,在正常细胞中不表达。但是 DKK1在多种非小细胞细胞系、组织中均高水平表达。与其它恶性肿瘤、良性肺疾病和健康对照组相比,肺癌患者血清中 DKK1浓度显著升高,可作为肺癌诊断的一种血清标志物。 目前关于肺癌中 DKK1特异性高表达的调控机制研究鲜有报道。我们的研究发现 DKK1启动子在肺癌细胞中的活性并不是很高,说明可能存在增强子等元件调控DKK1的表达。因此DKK1增强子元件的筛选将有助于DKK1的肺癌特异性调控机制研究。 本研究的关键难点在于对 DKK1基因增强子等转录调控元件在基因组中的分布进行预测及定位。为此,本文将四段不同长度的 DKK1启动子片段构建到pGL3-basic载体中。我们将构建得到的重组载体转染A549、H460、H446、Eca-109、Chang liver和 HEK293细胞,并通过双荧光素酶报告基因系统检测不同长度DKK1启动子片段活性,最终我们确定 DKK1-5片段活性较好,可作为 DKK1基因近端启动子片段。然后通过 UCSC人类基因组浏览器获取 A549细胞中DKK1基因位点的DNase I超敏性、组蛋白修饰等表观遗传信息。通过对这些信息的分析,预测得到12条候选增强子元件片段。最后将候选片段分别插入到DKK1-5近端启动子上游,成功构建了12种重组质粒。并在细胞水平上通过双荧光素酶报告基因检测系统验证相关候选元件的增强子活性。 本文首次获得六段候选元件: TRE3、TRE4、TRE6、TRE7、TRE8、TRE12在A549细胞中对DKK1启动子具有显著增强作用。TRE3、TR4、TRE12在H460中具有显著增强作用。且TRE3、TRE4、TRE7、TRE8对DKK1启动子的增强作用具有非小细胞肺癌特异性。 收起