摘要: 微生态制剂可以有效改变肠道菌群的组成，使其保持平衡或得到改善。常见的微生态制剂按其作用原理可分为3类，即益生菌、益生素和合生素，其中尤以益生素应用最为广泛。常见的益生素包括低聚果糖、菊粉、低聚半乳糖、大豆低聚糖等低聚糖。低聚糖可以在... 展开 微生态制剂可以有效改变肠道菌群的组成，使其保持平衡或得到改善。常见的微生态制剂按其作用原理可分为3类，即益生菌、益生素和合生素，其中尤以益生素应用最为广泛。常见的益生素包括低聚果糖、菊粉、低聚半乳糖、大豆低聚糖等低聚糖。低聚糖可以在多个方面发挥益生作用，如增强益生菌在消化道的存活能力，又如作为肠道菌群和乳酸菌代谢底物，促进益生菌生长。本研究选取鼠李糖乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌各一株，对低聚半乳糖、棉籽糖、水苏糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖6种低聚糖的益生作用进行了综合对比研究，可为低聚糖的进一步产品开发提供理论依据。 1.低聚糖对乳杆菌的生长促进作用 目的:考察不同低聚糖不同浓度对乳杆菌的生长促进作用。 方法:采用不含葡萄糖的MRS培养基，分别添加0、0.3％、0.6％、1.2％(w/v)浓度的6种低聚糖，接种乳杆菌后测定OD630，连续测定42h并绘制生长曲线进行分析。 结果:低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖和低聚果糖对3种实验菌株生长的支持较好，且表现出浓度效应。1.2％浓度时，低聚半乳糖或低聚异麦芽糖效果最好，接近于含葡萄糖的完全MRS肉汤（葡萄糖2％）。水苏糖和棉籽糖对实验菌株生长支持较差。 结论:不同低聚糖对乳杆菌生长促进效果不同，1.2％低聚半乳糖或低聚异麦芽糖对实验乳杆菌支持效果最优。 2.低聚糖对乳杆菌的活性保存作用 目的:考察常见实验室或生产保藏过程中低聚糖对乳杆菌的活性保存作用。 方法:采用不同处理过程，添加2％或20％低聚糖溶液，测定活菌数目或牛乳-pH变化曲线，考察低聚糖对乳杆菌的活性保存作用。处理过程包括硅胶干燥保存、冷冻保存和冷冻真空干燥保存。活菌计数反映存活菌数，而牛乳-pH曲线反映存活菌的延迟期，间接反映其活性状态。冻干菌粉进一步进行两周的室温保藏，测定菌体失活速率评估低聚糖对冻干菌粉的活性保护作用。针对效果较好的低聚糖，采用LC-MS分析冻干及保藏过程中低聚糖成分的组成和变化。 结果:冷冻保藏时，2％浓度的各种低聚糖具有近似的保护效果，而20％浓度时低聚果糖和低聚木糖表现出更好的保护作用。在干燥保藏和冻干保藏过程中，水苏糖和棉籽糖的保护效果最好，冻干菌粉室温保藏两周仍能保持较高乳酸菌活菌数。进一步的LC-MS分析表明，水苏糖和棉籽糖在冻干和保存过程中并未进入细胞内部被分解利用，可能通过在胞外提供一个较好的物理保护环境发挥作用。 结论:保藏益生菌时，可根据不同的保藏手段，合理选择低聚糖，达到较好的活性保存效果。 3.低聚糖对细菌黏附黏液层的影响 目的:考察不同低聚糖对肠道菌群中的非益生菌黏附黏液层的作用。 方法:采用固定化的牛血清蛋白和猪胃黏液素模拟肠道黏液层成分和结构，建立体外黏附模型，选用表达加强型绿色荧光蛋白的重组大肠埃希菌黏附作用1h后，去除未黏附细菌，激光共聚焦显微镜下观察黏附情况并计数分析。 结果:棉籽糖可显著增加重组E.coli对聚苯乙烯的黏附;低聚异麦芽糖可显著降低重组E.coli对BSA的黏附;水苏糖、低聚半乳糖和低聚果糖可显著增加重组E.coli对黏液素的黏附，棉籽糖可显著降低重组E.coli对黏液素的黏附。 结论:不同低聚糖作用效果的不同，表明低聚糖对细菌黏附分子的结合具有一定的结构特异性。 收起