摘要: 目的：探讨骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和肝细胞生长因子（HGF）基因修饰的兔骨髓间充质干细胞对前交叉韧带重建术后腱骨愈合的促进作用。 方法：①于兔双侧髂嵴处抽取骨髓血，分离和培养兔骨髓MSCs,并对获取的细胞进行鉴定；以携带骨形态发生蛋白-... 展开 目的：探讨骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和肝细胞生长因子（HGF）基因修饰的兔骨髓间充质干细胞对前交叉韧带重建术后腱骨愈合的促进作用。 方法：①于兔双侧髂嵴处抽取骨髓血，分离和培养兔骨髓MSCs,并对获取的细胞进行鉴定；以携带骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因的重组腺病毒和携带肝细胞生长因子（HGF）基因的重组腺病毒修饰兔骨髓MSCs,检测转染效率和目的蛋白的表达水平，并观察基因修饰对MSCs表面标志物、分化能力及增殖能力的影响。②将80只成年新西兰大白兔，随机分为对照组、MSCs组、MSCs-HGF组和MSCs-BMP2组，显露并切断兔正常前交叉韧带，切取自体趾长伸肌腱重建前交叉韧带，对照组在每侧胫骨的腱骨界面植入100ul纤维蛋白胶，MSCs组注射5×106MSCs+100ul纤维蛋白胶，MSCs-HGF组在界面植入5×106MSCs-HGF+100ul纤维蛋白胶，MSCs-BMP2组在界面植入5×106MSCs-BMP2+100ul纤维蛋白胶。分别在术后4、8、12周取材进行组织学研究，术后12周取材进行生物力学研究，分析评估腱－骨界面的愈合情况。 结果：①兔骨髓MSCs分离培养后细胞均一性好、成纤维细胞样形态，具有很强的增殖能力，表面特异性抗原CD29、CD44、CD73表达阳性，而CD31、CD45为阴性表达，诱导分化实验显示兔骨髓MSCs具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的能力。②腺病毒成功转染兔骨髓MSCs，MOI=150pfu/细胞是较理想的转染复数，基因转染后目的基因持续表达，48小时表达量最高；目的基因转染不影响细胞增殖和分化能力、不改变表面标志物。③MSCs-BMP2组术后4周和8周在腱骨界面之间出现软骨细胞，术后12周腱骨界面呈现肌腱、纤维软骨、矿化软骨向骨逐渐过渡；MSCs-HGF组术后4周在腱骨界面出现较多新生血管，术后8周血管逐渐减少，术后12周腱骨结合紧密，腱骨界面可见较多排列有序的胶原纤维。生物力学研究显示MSCs-BMP2组最大载荷和抗拉刚度均显著大于其他实验分组（P<0.05）；MSCs-HGF组和MSCs组最大载荷显著大于空白对照组（P<0.05）；MSCs-HGF组、MSCs组和空白对照组抗拉刚度无明显差异（P>0.05）。 结论：自体MSCs-BMP2移植能加速腱骨愈合过程，提高愈合质量，有利于直接止点结构的形成；自体MSCs-HGF移植有利于腱骨界面胶原纤维的重塑和血管的形成。 收起