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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: Fad24(factorforadipocytedifferentiation24)是一个在脂肪细胞分化早期阶段特异表达的基因。已有研究表明在前脂肪细胞(3T3-L1)中敲减fad24可抑制成脂分化早期的有丝克隆扩增(mitoticclonalexpansion,MCE)过程并阻断随后的终末分化,而在成纤维细胞... 展开 Fad24(factorforadipocytedifferentiation24)是一个在脂肪细胞分化早期阶段特异表达的基因。已有研究表明在前脂肪细胞(3T3-L1)中敲减fad24可抑制成脂分化早期的有丝克隆扩增(mitoticclonalexpansion,MCE)过程并阻断随后的终末分化,而在成纤维细胞(NIH/3T3)中超表达fad24则能赋予其成脂分化的能力。这表明fad24可促进成脂分化,但其作用机制尚不明确。 本研究利用细胞转染、双荧光素酶报告基因、定点突变、染色质免疫共沉淀、荧光定量PCR和RNA干扰等技术对fad24的转录调控机制进行了分析,并探讨了其与成脂分化转录级联调控的关联。我们证实了CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPβ和C/EBPδ)可直接结合于fad24启动子的顺式元件并调控其转录活性,进而对MCE过程进行调节,取得的主要结果如下: 1.获取小鼠fad24基因5'上游(-1128/+151)1279bp的区段并构建到荧光素酶报告基因载体,在NIH/3T3细胞中验证了其启动子活性。然后根据预测的C/EBP结合位点对其进行不同长度的截短(-896/+151、-450/+151、-164/+151),并分别对其启动子活性进行了验证。 2.将包含有fad24启动子截短片段的荧光素酶报告基因载体与C/EBPβ和C/EBPδ表达载体分别共转染细胞,发现C/EBPβ对fad24启动子活性有显著的下调作用,而C/EBPδ对其有显著的上调作用。 3.在3T3-L1细胞内超表达C/EBPβ和C/EBPδ对内源fad24转录水平的调节与其对fad24启动子的作用一致。 4.突变fad24启动子的-605/-591和-354/-340位点可减弱或消除C/EBPβ和C/EBPδ对fad24启动子的调节效应。 5.染色质免疫共沉淀实验证实在细胞内C/EBPβ和C/EBPδ均可直接结合于fad24启动子的-354/-340位点处。 6.在3T3-L1细胞中敲减C/EBPδ可下调fad24和cyclinD1的转录,并上调P21的mRNA水平,从而抑制MCE。在此细胞中超表达fad24可部分挽救敲减C/EBPδ引发的对细胞增殖的影响。 收起
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