摘要: 墨蝶呤(sepiapterin，SP)是一种黄色的蝶呤类化合物，属于蝶啶的衍生物。研究表明SP在生物的细胞代谢过程中有着重要的辅助作用，它是形成昆虫体色的主要内源性色素之一，也是GTP分解代谢通路中的代谢中间体。对于哺乳动物而言，SP则是补救途径合成四... 展开 墨蝶呤(sepiapterin，SP)是一种黄色的蝶呤类化合物，属于蝶啶的衍生物。研究表明SP在生物的细胞代谢过程中有着重要的辅助作用，它是形成昆虫体色的主要内源性色素之一，也是GTP分解代谢通路中的代谢中间体。对于哺乳动物而言，SP则是补救途径合成四氢生物蝶呤(tetrahydrabiopterin，BH4)的前体物质，而BH4是芳香族氨基酸单氧化酶如色氨酸羟化酶、酪氨酸羟化酶和苯丙氨酸羟化酶的重要辅酶，也是一氧化氮合酶(NOS)的重要辅助因子，BH4的合成障碍会导致多种生理代谢疾病或神经性代谢综合症。大量动物实验和临床研究证明，口服BH4对因BH4缺乏而导致的疾病有明显的治疗效果。SP作为补救通路中合成BH4的底物，补充SP对某些疾病也有良好的治疗效果。 lem蚕(lemon，lem)是家蚕的一种黄体色突变体，其体内由于缺乏SP还原酶而使幼虫体表富含SP色素，是获取SP的宝贵生物资源。本研究以从lem蚕体表分离纯化天然SP，从而把提纯的SP进一步应用于BH4的体外合成为目标，对SP的提取纯化条件进行筛选和优化，建立了一套行之有效的实验体系。 本实验采用溶剂浸提法从lem蚕体表提取SP，利用柱层析对SP进行分离纯化，通过优化实验体系，获得了提取与纯化SP的最佳工艺条件。实验结果表明，在以50％乙醇作为浸提溶剂，料液比为1:20的条件下可获得较高的色素提取率；以ECTEOLA纤维素柱为色素分离柱、以水-0.01％乙酸梯度洗脱分离柱，能够有效的将SP与其他色素分开；以sephadexG-25-150柱和phosphate纤维素柱为色素纯化柱，以纯水为纯化柱的流动相，取得了良好的纯化效果，经此实验体系获得的SP纯度较高。本实验利用纸色谱法、紫外可见吸收光谱法和高效液相色谱法对SP进行了定性和定量分析。 同时，利用高效液相色谱法对所提取的SP进行了定性定量分析。色谱条件为：用ODSC18色谱柱(250mm×4.6mm，5um)，以超纯水-99.9％甲醇-99.9％冰乙酸(体积比为79.5:20:0.5)为流动相，流速为1ml/min，柱温为25℃，检测波长为420nm。该方法操作灵敏度高、简便、准确、重复性好，可有效的对SP进行鉴定和分析。 目前市售的SP和BH4主要通过化工有机合成，价格十分昂贵。相比之下，本研究所建立的实验体系具有成本低廉、工序简单、产量可观等明显优势。SP的提取量可达46.8ug/g蚕体壁，研究成果为今后从lem蚕体大规模工业化纯化回收天然SP，进而通过体外合成的途径制备BH4的应用研究奠定了切实可行的理论基础。 收起