摘要: 本课题采用ISSR分子标记对江西省蕙兰(CymbidiumfaberiRolfe)的遗传多样性进行了分析,目的在于了解蕙兰居群的遗传多样性水平、遗传结构以及居群间的遗传分化,并提出了相应的保护措施,为合理开发利用和保护蕙兰资源提供了科学的指导和依据。主要研究结... 展开 本课题采用ISSR分子标记对江西省蕙兰(CymbidiumfaberiRolfe)的遗传多样性进行了分析,目的在于了解蕙兰居群的遗传多样性水平、遗传结构以及居群间的遗传分化,并提出了相应的保护措施,为合理开发利用和保护蕙兰资源提供了科学的指导和依据。主要研究结果如下: 用正交设计法建立了蕙兰ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序。最佳反应体系:25μlPCR反应的体积中,2.5μl10×PCRbuffer,2.5mmol/LMg2+,120ng模板DNA,200μmol/LdNTPs,0.75UTaqDNA聚合酶,0.4.μmol/L引物,双蒸水15.35μl;最佳扩增程序为:94℃预变性5min,然后进行40个循环:94℃变性45s,复性(温度根据各引物的Tm值筛选得到)45s,72℃延伸80s,循环结束后72℃延伸7min,4℃保存。 筛选出12条引物对255个样品进行扩增,得到142条谱带,其中多样性条带为129条,多态性条带百分率为90.85%。用POPGENE软件分析结果表明,蕙兰物种水平的遗传多样性(PPF-90.85%,Hpop=0.2892,I=0.4393)和居群水平的遗传多样性(PPF=59.4.0%,Hpop=0.1886,I=0.2865)都较高。其中,南丰居群(NF)的遗传多样性最高(PPF=73.94%,Hpop=0.2498,I=0.3764);贵溪居群(GX)的遗传多样性最低(PPF=45.77%,Hpop=0.1327,I=0.2053)。 用POPGENE软件计算Nei’s遗传距离(D)和遗传相似性系数(I)。结果显示17个居群两两之间的遗传距离(D)和遗传相似性系数(I)的变化范围为0.0278～0.24.76和0.7807～0.9726。其中贵溪(GX)居群和资溪(ZX)居群之间的遗传距离最小(0.0278);XS居群和SC居群之间的遗传距离最大(0.2476)。用NTSYS-pc软件对Nei’s遗传距离进行UPGMA聚类,结果显示蕙兰分为两个谱系(Ⅰ和Ⅱ)。谱系Ⅰ又分为两个分支,第一分支是贵溪(GX)和资溪(ZX)居群先聚类,再依次与靖安(JA)、庐山(LS)、玉山(YS)居群聚在一起;第二个分支先分成两个小分支:南丰(NF)和邵武(SW)居群聚类后与石城(SC)居群聚类形成第一小分支;井冈山(JGS)与崇义(CY)居群先聚类,再依次与会昌(HC)、安福(AF)居群聚在一起形成第二小分支。在谱系Ⅱ中修水(XS)和武宁(WN)先聚类,再依次与横丰(HF)、铜鼓(TG)、宜丰(YF)居群聚在一起。 用AMOVA软件分析显示,蕙兰居群间遗传分化系数stΦ,为0.362,表明江西蕙兰居群间的遗传分化小于居群内的遗传分化。各大山脉居群间的遗传分化系数从小到大依次为:罗霄山脉3个居群间Φst=0.189、武夷山脉6个居群间Φst=0.313、幕阜山脉3个居群间Φst=0.386、怀玉山脉2个居群间Φst=0.417、九岭山脉3个居群间Φst=0.423,即各大山脉居群的居群间遗传分化均小于居群内遗传分化。与POPGENE1.31分析结果基本一致。 用TFPGA软件对蕙兰17个居群的遗传距离和地理距离进行Mantel统计分析,并做显著性检验。结果显示遗传距离和地理距离的相关值为:r=0.2399,p=0.0140>0.05,表明地理隔离与遗传分化相关性不明显。 根据蕙兰遗传多样性水平和遗传结构提出了相应的保护措施,如就地保护,居群间相互移植,加强保护意识等。 收起