摘要: 竹子遗传育种研究比较薄弱。本研究以马来甜龙竹的成熟种胚为外植体,通过愈伤组织途径,建立了其高效、稳定的再生体系。在此基础上,结合本课题组建立的版纳甜龙竹的再生体系,开展了转基因研究,初步建立了竹子的遗传转化体系,为竹子的遗传改良打下了良... 展开 竹子遗传育种研究比较薄弱。本研究以马来甜龙竹的成熟种胚为外植体,通过愈伤组织途径,建立了其高效、稳定的再生体系。在此基础上,结合本课题组建立的版纳甜龙竹的再生体系,开展了转基因研究,初步建立了竹子的遗传转化体系,为竹子的遗传改良打下了良好的基础。主要的研究结果如下: 1.马来甜龙竹再生体系的建立 (1)优化的愈伤组织诱导培养基:MS+蔗糖30g/L+2,4-D3mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500mg/L+水解酪蛋白500mg/L+agar8g/L(TypeA),愈伤组织的诱导率达到85％以上,并且较好的愈伤组织诱导率占30％左右。 (2)优化的增殖培养基:MS+蔗糖30g/L+2,4-D0.5mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500mg/L+水解酪蛋白500mg/L+agar8g/L(TypeA')。 (3)优化的分化培养基:MS+蔗糖30g/L+BA2mg/L+KTlmg/L+NAA0.5mg/L+gelrite0.3％,分化率约45％。本实验中继代次数以2次即6周为最好,愈伤组织继代次数4次或5次时,分化率明显降低,并且易分化出白化苗。 (4)优化的生根培养基为1/2MS+蔗糖30g/L+3mg/L的IBA+gelrite0.3％。生根率高达90％,每个植株的平均诱导根数为6-7条,最高可达约15条,诱导出的根的平均长度约3.39cm。 (5)生根的试管苗驯化后移栽到等比例的泥炭、蛭石和珍珠岩的混合基质中,植株的成活率达95％以上。 2.竹子转基因研究 以版纳甜龙竹的愈伤组织为受体,通过农杆菌把pCAMBIA1301载体相关DNA片段转入版纳甜龙竹的愈伤组织中,通过再分化成功获得10株抗性再生植株,转化率达到35.7％。对其进行PCR分子检测及其电泳产物测序,结果证实潮霉素磷酸转移酶基因已转入竹子的基因组中。 在马来甜龙竹转基因研究中,愈伤组织在添加潮霉素进行筛选培养6周后转移至分化培养基,成功分化出2株白化苗和1管长有绿点的愈伤组织,现还未对其进行检测。 收起