摘要: 本论文研究低温、干旱胁迫沙冬青EST库中RNA结合蛋白基因AmRRM,锌指蛋白基因AmZFPG和AmSTZF,钙调素基因AmCaM的功能。首先,对这四个基因分别进行了生物信息学分析,包括cDNA序列、氨基酸性质、蛋白质的保守性、进化关系和蛋白质结构的分析及亚细胞定位... 展开 本论文研究低温、干旱胁迫沙冬青EST库中RNA结合蛋白基因AmRRM,锌指蛋白基因AmZFPG和AmSTZF,钙调素基因AmCaM的功能。首先,对这四个基因分别进行了生物信息学分析,包括cDNA序列、氨基酸性质、蛋白质的保守性、进化关系和蛋白质结构的分析及亚细胞定位和功能的预测,初步判断这些基因是与胁迫响应相关的基因。其次,采用.RT-PCR的方法检测低温和干旱处理条件下的沙冬青叶片中这四个基因的表达。结果表明这四个基因的表达是与低温、干旱胁迫相关的。为了进一步研究基因的功能,将这四个基因构建到原核表达载体pet30a上,转入大肠杆菌BL21,诱导表达目的蛋白。经SDS-PAGE电泳检测,证明AmRRM和AmCaM基因在大肠杆菌中能够表达融合蛋白。在此基础上,用AmRRM蛋白制备抗体,western blotting检测AmRRM基因在植物中的表达。同时,将AmRRM、AmZFPG、AmSTZF三个基因构建到真核表达载体2300上。转入农杆菌LBA4404,用叶盘侵染法转化野生型烟草。将野生型和转基因植株在低温(4℃)处理,测定转基因植株和野生型植株电导率。初步实验结果显示,转基因的烟草比野生型烟草表现出更强的抗寒性,推断AmRRM,AmZFPG,AmSTZF这三个基因具有提高植物抗寒性的功能。 收起