摘要: 目前正畸治疗过程中由于口腔卫生不佳患牙龈炎甚至牙周炎的人数在不断的增多。同时牙周炎常造成牙齿的松动和移位，需要通过牙周和正畸联合治疗以恢复牙齿的正常功能和美观。如何才能实现静止状态下牙周炎患牙安全有效的正畸治疗成为正畸医生极为关注... 展开 目前正畸治疗过程中由于口腔卫生不佳患牙龈炎甚至牙周炎的人数在不断的增多。同时牙周炎常造成牙齿的松动和移位，需要通过牙周和正畸联合治疗以恢复牙齿的正常功能和美观。如何才能实现静止状态下牙周炎患牙安全有效的正畸治疗成为正畸医生极为关注的问题。 LPS是Gˉ细菌细胞壁的主要成分，对牙周组织有很强的毒性和抗原性，是牙周致病菌重要的毒力因子。研究表明，LPS刺激单核巨噬细胞后释放多种炎症因子，如IL-1β、IL-6和TNF-α等，可导致骨吸收。作为一种即刻早期基因，原癌基因c-fos在受到外界刺激时可快速激活和表达升高，而牙周组织中c-fos的检出提示它与成骨细胞、破骨细胞及成纤维细胞的功能活动存在紧密联系。近年c-fos在应力作用下的表达也逐渐受到重视，赵志河等的研究中表明，成骨细胞中c-fos的上调与力的加载持续时间有关，并且与细胞骨架的改变有密切联系。 本研究拟通过建立炎性刺激下的成骨细胞模型---PgLPS刺激RAW264.7的培养上清作用于小鼠成骨细胞系MC3T3-E1，并进一步研究张应力对炎性刺激下成骨细胞c-fos的影响，以进一步探讨牙周炎症状态下正畸力作用下骨改建的影响。其中炎性刺激下的成骨细胞模型的建立已由课题组成员协助师姐完成。 本论文由三部分组成： 第一部分：PgLPS刺激RAW264.7的炎性上清对成骨细胞增殖活性的影响 目的：观察经脂多糖(PgLPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖活性的影响。 方法：收集经100ng/mlPgLPS刺激的RAW264.7培养上清，以不同稀释浓度(0%，10%，20%...100%)的培养上清作用于MC3T3-E124h，48h后，用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性，采用SPSS17.0进行统计学分析。 结果：MC3T3-E1经不同稀释浓度的培养上清刺激后，MC3T3-E1增殖活性受到抑制，且与培养上清呈浓度及时间依赖性。 结论：PgLPS刺激的RAW264.7培养上清可抑制MC3T3-E1的增殖。 第二部分：PgLPS刺激RAW264.7的炎性上清对成骨细胞c-fos及ALP表达的影响 目的：研究经牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis，P．g)脂多糖(LPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)c-fos表达的影响。 方法：收集100ng/m1的PgLPS刺激RAW264.724h后的上清液，以20%稀释浓度分别作用于MC3T3-E1，分别在1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h时，采用RT-PCR和Westernblot检测ALPmRNA、c-fosmRNA及蛋白表达水平的变化。 结果：PgLPS刺激RAW264.7细胞培养上清作用于MC3T3-E1后，ALPmRNA表达均下降，在6h时表达最低，而c-fos的mRNA和蛋白水平均提高，分别在3h和6h时达最高水平。 结论：PgLPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过上调成骨细胞c-fos的表达而抑制其成骨能力。 第三部分：张应力对炎性刺激下成骨细胞c-fos及ALP表达的影响 目的：研究不同强度的循环单轴张应力对炎性刺激下小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)立早基因c-fos表达的影响。 方法：分别对前期实验培养的炎性与非炎性状态下的成骨细胞MC3T3-E1施加0.5HZ．1000ustrain和3000ustrain的循环单轴张应力各5min、15min、30min、1h、3h、6h，用Real-TimePCR和westernblot分别检测c-fosmRNA及蛋白表达水平的变化，用ALP试剂盒检测细胞活性的变化。 结果：施加两种不同强度的张应力后，非炎性与炎性状态下的MC3T3-E1细胞c-fosmRNA和蛋白相对表达水平都随应力加载的持续时间逐渐升高，前者3h时达到最高点，之后逐渐下降，而后者1h即达到最高，之后逐渐下降，并在6h又再次升高：不同强度的张应力作用于同种状态下的成骨细胞，其c-fosmRNA和蛋白相对表达水平无显著差异。两种状态下的成骨细胞受力后其ALP活性明显降低(P＜0.05)。 结论：不同强度的循环单轴张应力，作用于炎性状态下的成骨细胞，可通过上调c-fos的表达而抑制其成骨及分化功能。 收起