摘要: 目的： 通过分析肝细胞癌（HCC）中Wnt.5a、Ror2 mRNA及蛋白的表达情况，探讨Ror2是否为Wnt-5a的下游基因；结合β-Catenin蛋白的表达分析Wnt-5a、Ror2与Wnt/β-Catenin经典途径间的关系及Wnt经典与非经典通路在HCC发生、发展中的作用，同时探讨Wnt-... 展开 目的： 通过分析肝细胞癌（HCC）中Wnt.5a、Ror2 mRNA及蛋白的表达情况，探讨Ror2是否为Wnt-5a的下游基因；结合β-Catenin蛋白的表达分析Wnt-5a、Ror2与Wnt/β-Catenin经典途径间的关系及Wnt经典与非经典通路在HCC发生、发展中的作用，同时探讨Wnt-5a、Ror2与各临床病理因素及患者术后生存率间的关系，为HCC的防治及预后判断提供新的理论思路。 方法： 1、采用RT-PCR技术对19例手术切除的新鲜HCC样本癌与相应癌旁组织（距肿瘤边缘2cm以上）行Wnt-5a、Ror2基因mRNA的检测。 2、采用免疫组化SP法对62例HCC癌与癌旁组织、10例肝硬化组织及6例经血清学证实为无HBV感染的肝内胆管结石或外伤性肝破裂切除的正常肝组织行Wnt-5a、Ror2和β-catenin蛋白表达的检测。 3、对每例HCC患者进行术后随访，经Kaplan-Meier法、Log Rank检验等探讨Wnt-5a、Ror2在HCC患者预后中的价值；运用Cox比例风险模型进行生存率的多因素分析，评价患者预后生存指标。 结果： 一、RT-PCR反应结果 1、Wnt-5a基因mRNA在HCC癌及癌旁组织中表达的相对含量分别为：0.102030±0.158560、0.020113±0.022084，两组比较差异有统计学意义（t=2.22，P=0.039）。Wnt-5a基因mRNA在78.95％（15/19）的癌组织中显示上调。 2、Ror2基因mRNA在HCC癌及癌旁组织中表达的相对含量分别为：0.001665±0.002585、0.006504±0.012512，两组比较差异无统计学意义（t=-1.934，P=0.069），Ror2基因mRNA在73.68％（14/19）的癌组织中显示下调。 二、免疫组化结果 1、Wnt-5a蛋白在正常肝组织中呈阴性或弱阳性胞质内表达；在90％（9/10）的肝硬化及82.26％（51/62）的癌旁组织中呈弥漫颗粒状中等或强阳性表达，而在癌组织中仅有14.52％（9/62）呈阳性表达；相比于肝硬化及癌旁组织的阳性表达，Wnt-5a在85.49％（53/62）癌组织中显著底或缺失表达，差异有统计学意义（P<0.001）。癌组织中Wnt-5a低或缺失表达与高的肿瘤分期（P=0.004）、高的AFP水平（P=0.013）以及高的Ki-67指数（P=0.006）有关；与病人的性别、年龄、肿瘤的大小、有无HBsAg感染、肝硬化及分化程度等因素无关（P>0.05）。 2、Ror2蛋白在正常肝组织中呈阴性或弱阳性胞质内表达；在80％（8/10）的肝硬化及85.48％（53/62）的癌旁组织中呈弥漫颗粒状的中等或强阳性表达，而在癌组织中仅有19-35％（12/62）呈阳性表达；Ror2在80.65％（50/62）的癌组织中低表达与在肝硬化及癌旁组织的高表达差异有统计学意义（P<0.001）。癌组织中Ror2低表达与高的肿瘤分期（P=0.021）、高的AFP水平（P=0.004）有关；与病人的性别、年龄、肿瘤的大小、肝硬变、HBsAg及肿瘤的分化程度等因素无关（P>0.05）。 3、β-catenin蛋白在正常肝组织中呈胞膜的清晰棕黄色线性表达；癌组织中出现3种异常表达形式，即：胞膜的下降表达及胞质和/或胞核的异常染色。本组病例中肝硬化及癌旁组织中未见胞核的表达形式。对比于正常肝组织胞膜的线性表达，β-catenin在67.74％（42/62）的癌组织中出现的胞膜下调表达及胞质和/或胞核的染色差异有统计学意义（P<0.001）。统计结果分析显示，癌组织中β-catenin的异常表达与肿瘤低的分化程度有关（P=0.001）；而与病人的性别、年龄、肿瘤的大小、AFP水平，肿瘤分期、有无HBsAg感染及肝硬化等临床病理因素无关（P>0.05）。 三、基因与蛋白表达的相关性分析 1、HCC中Wnt-5a及Ror2基因mRNA表达呈负相关关系（r=-0.571，P=0.011）。 2、HCC中Wnt-5a基因mRNA与蛋白的表达无相关性（r=-0.367，P=0.123）。 3、HCC中Ror2基因mRNA与蛋白的表达呈正相关关系（r=0.457，P=0.049）。 4、HCC中Wnt-5a蛋白的低表达与Ror2蛋白的低表达呈正相关关系（r=0.340，P<0.01）；Wnt-5a蛋白的低表达及Ror2蛋白的低表达与β-catenin蛋白的异常表达均呈负相关关系（r=-0.389，P=0.002：r=-0.300，P=0.018）。 四、肝细胞癌术后生存分析 Kaplan-Meier生存分析显示：HCC中Wnt-5a及Ror2阴性表达与患者生存时间和生存率相关（P<0.05）。Cox比例风险回归模型提示：患者术后生存率与患者差的肿瘤分期（P=0.005）、肿瘤低的分化程度（P=0.004）和伴有肝硬化（P=0.011）等因素有关：而与病人的性别、年龄、肿瘤的大小、AFP水平、有无HBsAg感染等因素无关（P>0.05）。 结论： 1、Wnt-5a蛋白的下调表达是HCC发生、发展过程中的频发事件，具有肿瘤抑制基因样作用，对患者预后有一定影响，是一个有用的HCC诊断标志物和预后不良的指标。 2、Ror2低表达是HCC发生及演进过程中的频发及早期事件，在HCC中发挥抑癌基因样作用，对患者预后有一定影响，其异常活化部分参与了HCC的发生、发展过程。 3、β-catenin的异常定位与HCC的发生相关，在此过程中β-catenin显示了原癌基因样的作用。 4、Wnt-5a蛋白与Ror2蛋白在癌组织中的表达呈正相关关系，提示Ror2为Wnt-5a的下游基因，两者共同介导Wnt非经典通路。HCC的发生涉及了经典与非经典两条不同的Wnt信号通路，而且两条通路相互抑制。 收起