摘要: 目的：通过离体培养兔角膜基质细胞，研究血竭素高氯酸盐(dracorhodin perchlorate，Dp)对离体兔角膜基质细胞的增殖抑制作用。 方法：应用组织块培养法对兔角膜基质细胞进行原代培养：分别采用波形蛋白单克隆抗体、角蛋白12多克隆抗体进行免疫荧光... 展开 目的：通过离体培养兔角膜基质细胞，研究血竭素高氯酸盐(dracorhodin perchlorate，Dp)对离体兔角膜基质细胞的增殖抑制作用。 方法：应用组织块培养法对兔角膜基质细胞进行原代培养：分别采用波形蛋白单克隆抗体、角蛋白12多克隆抗体进行免疫荧光细胞化学染色鉴定；倒置相差显微镜下观察细胞体外生长特性，MTT比色法绘制细胞生长曲线，细胞计数法计算细胞群体倍增时间；应用MTT比色法检测Dp浓度分别为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml作用于兔角膜基质细胞24h、48h、72h对细胞增殖的抑制作用，计算出抑制率和IC50，并对其进行比较；倒置相差显微镜及电镜观察不同Dp浓度作用于细胞24h后细胞的形态变化；流式细胞仪对不同Dp浓度作用于细胞24h后的细胞周期分布及细胞凋亡情况进行定量分析。 结果：采用组织块培养法8～10d培养出兔角膜基质细胞；抗波形蛋白免疫荧光染色阳性证实所培养的细胞为角膜基质细胞；细胞生长曲线近似“S”形，细胞群体倍增时间为(30.73±2.47)h；在作用24h、48h和72h时间段，MTT比色法显示随着Dp浓度的增加，A值呈明显的下降趋势(P<0.001)，抑制率具有明显的剂量-效应及时间-效应依赖关系，三个时间点的IC50分别为47.72μg/ml、41.40μg/ml、32.01μg/ml；倒置相差显微镜及电镜观察到随着Dp浓度的增加，凋亡细胞比例增多；流式细胞仪检测结果显示随着Dp浓度的增加，G0/G1期细胞比例逐渐增加(P<0.001)，细胞增殖指数逐渐减少(P<0.001)，细胞凋亡率增加(P<0.001)。 结论：Dp对离体培养的兔角膜基质细胞的增殖具有抑制作用，且随Dp浓度的增加，细胞凋亡率增加。 收起