摘要: DNA电化学生物传感器是近几年迅速发展起来的一种全新的生物传感器，它是进行核酸结构分析和检测的重要手段之一，由于它具有测定快速、简便、灵敏、价廉等优点，越来越受到人们的关注。 本文成功研制了一种以2-硝基吖啶酮(2-NAD)为杂交指示剂用于... 展开 DNA电化学生物传感器是近几年迅速发展起来的一种全新的生物传感器，它是进行核酸结构分析和检测的重要手段之一，由于它具有测定快速、简便、灵敏、价廉等优点，越来越受到人们的关注。 本文成功研制了一种以2-硝基吖啶酮(2-NAD)为杂交指示剂用于检测急性早幼粒细胞白血病(APL)中PML/RARα融合基因的DNA电化学生物传感器。实验结果表明，2-NAD是一种特异性较强的指示剂，能够有效地区分PML/RARα融合基因的互补与非互补序列。PMIL/RARα探针电极在pH4.0的磷酸盐缓冲液(PBS)底液中，2-NAD浓度10μM，与1.31×10-7M探针互补链45℃杂交30min，检测信号效果良好。互补DNA在9.08×10-8～5.45×10-7M浓度范围内，与检测信号成一次线性关系，检测限达到2.1×10-8M，可以实现对APT中PML/RARcα基因定性定量的测定。 此外，本文还构建了基于电化学交流阻抗技术直接监测DNA杂交的方法，对多种实验条件进行了优化。首先将5'端巯基修饰的22个碱基长度的寡聚核苷酸探针和巯基乙酸同时自组装到金电极(AuE)表面，形成杂交分子识别层。然后用交流阻抗技术进行监测，取杂交前后电极表面电子传递电阻的改变值作为杂交信号。实验中优化了杂交识别层的固定时间、探针和巯基乙酸的比例、杂交温度和时间，以及阻抗值测量液的离子强度。在各优化的条件下，探针DNA与1.0×10-8M的目标DNA 45℃杂交30min。检测到杂交前后的Ret有明显的差异，表明可以通过交流阻抗法实现对PML/RARα基因定性的测定。 在对APL实际样品的初步实验研究中，用设计好的上下游引物对已提取的样品cDNA进行PCR，凝胶电泳后，将回收的胶片段进行测序分析，确定了与目标DNA完全互补的特异性探针序列，为实际样品的进一步检测研究提供了良好的基础。 收起