摘要: 【目的】 建立盆腔器官脱垂(pelvie organ prolapse，POP)患者及非脱垂对照者阴道组织蛋白质的双向凝胶电泳图谱，并结合质谱技术分析其差异表达蛋白质，寻找POP疾病相关蛋白，以进一步阐明POP的发病机制。 【方法】 1、收集绝经后的、年龄相... 展开 【目的】 建立盆腔器官脱垂(pelvie organ prolapse，POP)患者及非脱垂对照者阴道组织蛋白质的双向凝胶电泳图谱，并结合质谱技术分析其差异表达蛋白质，寻找POP疾病相关蛋白，以进一步阐明POP的发病机制。 【方法】 1、收集绝经后的、年龄相匹配的POP组和对照组手术中取得的尿道周围阴道壁组织标本各10例，置于-80℃超低温冰箱保存。 2、提取组织总蛋白，进行双向凝胶电泳(two-dimcnsional gel electrophoresis，2-DE)得到凝胶图谱，采用ImageMaster5.0 2D图象分析软件进行匹配和差异分析，识别两组之间差异表达蛋白点。 3、将部分差异蛋白点进行胶内原位酶解后进行MALDI-TOF-MS分析，获取肽质量指纹图谱，数据库搜索鉴定蛋白质。 【结果】 得到了分辨率较高，重复性较好的POP组和对照组阴道壁组织的双向凝胶电泳图谱。POP组凝胶的平均蛋白质点数为871±96个，正常对照组平均蛋白质点数为856±89个。凝胶上的蛋白质点在位置上有较好的重复性，不同胶间蛋白质点在等电聚焦方向上的偏差为(1.73±0.18)mm，在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.87±0.22)mm；比较POP组及对照组阴道组织的双向凝胶电泳图谱，未匹配点数为109±15个，差异表达蛋白质点数为27个，其表达水平相差两倍以上。选取其中8个具有明显差异的蛋白点进行质谱鉴定，初步鉴定出5种蛋白质。分别是角蛋白13、角蛋白1、transgelin、cysteine and glycine-richprotein1(CRPl)和T-bet。其中transgelin和CRP1仅在POP组表达；T-bet仅在对照组中检测到；角蛋白13和角蛋白1在POP组中的表达量相对于对照组降低6倍以上。 【结论】 1、运用双向凝胶电泳结合质谱技术研究POP疾病相关蛋白是可行的。 2、角蛋白13和角蛋白1在POP患者阴道组织中表达显著下调提示POP患者阴道上皮层的分化受抑制，导致阴道上皮层变薄，影响阴道壁的支撑作用，因而易发生POP。 3、transgelin仅在POP组阴道组织中表达而不表达于对照组；结合以往研究中的结果：POP患者阴道组织中Ⅲ型胶原含量增高。推测是因为transgelin抑制MMP-9对Ⅲ型胶原的分解，导致阴道组织中Ⅲ型胶原堆积，POP患者阴道组织中I、Ⅲ型胶原比例失衡，最终导致组织抗拉强度变弱，从而发生脱垂。 4、CRP1是肌分化重要的正性调节物，CRP1在POP患者阴道组织中高表达而不出现于对照组中，可能与阴道平滑肌组织受损后代偿性修复有关。 5、T_bet仅在对照组中表达，POP组患者中未检测到，推测可能致使POP患者阴道组织免疫防御功能减弱，易受病原体侵犯而加重阴道组织结构的破坏。 收起