摘要: 目的： 构建糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)特异的RNAi腺病毒表达载体，从转录后水平抑制GSK-3β基因表达，为研究(Wnt/β-catenin)信号通路提供技术工具；初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。 方法： 设计合成三... 展开 目的： 构建糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)特异的RNAi腺病毒表达载体，从转录后水平抑制GSK-3β基因表达，为研究(Wnt/β-catenin)信号通路提供技术工具；初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。 方法： 设计合成三对针对GSK-3β不同位点的shRNA编码序列，克隆到穿梭载体中，后通过体外同源重组将siRNA表达盒转移到腺病毒骨架质粒，构建GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体；在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度；腺病毒感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，Western Blot和免疫细胞化学法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应，并进一步检测其对细胞内β-catenin蛋白水平的影响；利用构建的RNAi腺病毒感染HUVEC，抑制GSK-3β表达，上调Wnt/信号通路，四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞增殖的影响。 结果： 成功构建了GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体，获得高滴度的腺病毒液。构建的腺病毒感染人脐静脉内皮细胞可以显著抑制GSK-3β蛋白的表达，在腺病毒的影响下，β-catenin的蛋白水平亦有明显增加。腺病毒感染1天、3天、5天、7天后，腺病毒组与空病毒组相比，细胞增殖率明显增加([p<0.05、p<0.01)。 结论： 构建GSK-3β特异的siRNA腺病毒能有效抑制GSK-3β基因的表达，明显影响β-catenin的蛋白水平，上调Wnt/β-catenin信号通路，对人脐静脉内皮细胞增殖有重要的影响。 收起