摘要: 目的：探讨Ezrin在胰腺癌组织中的表达及其在胰腺癌恶性进展中的作用。并通过观察黄芩素对PANC-1细胞Ezrin表达的影响，探讨黄芩素抗肿瘤作用的可能机制。 方法：收集1997年2月～2005年9月中南大学湘雅医院和河南大学淮河医院手术切除的46例胰腺癌... 展开 目的：探讨Ezrin在胰腺癌组织中的表达及其在胰腺癌恶性进展中的作用。并通过观察黄芩素对PANC-1细胞Ezrin表达的影响，探讨黄芩素抗肿瘤作用的可能机制。 方法：收集1997年2月～2005年9月中南大学湘雅医院和河南大学淮河医院手术切除的46例胰腺癌石蜡包埋组织标本及同期其他手术切除的13例正常胰腺石蜡包埋组织标本，运用免疫组织化学染色(SABC)方法观察Ezrin在胰腺癌组织的表达情况，并分析其表达与胰腺癌临床病理因素和预后的关系。 体外培养人胰腺癌PANC-1细胞，通过化学合成的小干扰RNA(siRNA)下调人胰腺癌PANC-1细胞Ezrin表达后，运用MTT法、流式细胞仪、划痕愈合实验(Wound healing assay)、扫描电镜和侵袭小室实验(Transwell assay)等方法，观察肿瘤细胞增殖、细胞周期、伪足形成、侵袭和迁移能力的改变。并用Western Blot和RT-PCR检测黄芩素干预后肿瘤细胞Ezrin蛋白、磷酸化Ezrin蛋白及EzfinmRNA表达的变化。 结果：免疫组织化学染色显示胰腺癌组织中Ezrin阳性表达率为89.1％(41/46)，其中，强阳性表达率为45.7％(21/46)，正常胰腺组织中Ezrin阳性表达率为53.8％(7/13)。癌组织中阳性表达率显著高于正常胰腺组织(P=0.009，Fisher精确检验)。Ezrin强阳性表达率随肿瘤分化程度的降低而增高(X2=7.725，P=0.021)；有淋巴结转移者Ezrin强阳性表达率显著高于无淋巴结转移者(X2=3.989，P=0.046)，但其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期无关。值得注意的是Ezrin在淋巴管或血管癌栓组织中均呈强阳性表达。Ezrin强阳性表达组术后中位生存时间为16个月(9-36个月)，Ezrin呈弱阳性及阴性表达组术后中位生存时间为24个月(8～50个月)，经log-rank检验，两组差异有显著意义(X2=4.860，P=0.0276)。 Western印迹结果显示，Ezrin siRNA对Ezrin蛋白表达水平有显著的下调作用。下调Ezrin蛋白后，PANC-1细胞增殖明显被抑制，G2/M期细胞显著降低(P<0.05)；同时伴随着S期细胞减少，而G0/G1期增加，细胞伪足形成显著减少，肿瘤细胞的运动侵袭能力下降，穿过人工基底膜的细胞数量明显减少，与干扰前比较差异有统计学意义(P<0.01)，但未观察到RNA干扰对细胞凋亡有影响。 黄芩素对PANC-1细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强，呈明显的时间和剂量依赖性；WestemBlot和RT-PCR结果显示，黄芩素明显降低Ezrin、磷酸化Ezrin及Ezrin-mRNA在PANC-1细胞中的表达，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论： 1、Ezrin在胰腺癌组织中存在过表达，且其表达水平与胰腺癌侵袭转移和预后密切相关，提示Ezrin可以作为反映胰腺癌预后的一种有价值的分子标志物。 2、siRNA下调Ezrin蛋白表达后，对胰腺癌细胞的恶性增殖、侵袭和迁移能力具有明显抑制作用。提示该分子可能成为抑制胰腺癌侵袭转移的靶点。 3、黄芩素呈剂量和时间依赖性抑制胰腺癌细胞增殖，而且明显下调Ezrin-mRNA和Ezrin蛋白表达及其磷酸化活化。提示黄芩素可通过抑制Ezrin表达及活化从而抑制肿瘤细胞恶性增殖、侵袭和迁移能力，可能成为抗肿瘤治疗的新的药物。 收起