摘要: 第一节NRK-52E缺血再灌注损伤时TLR-4基因mRNA表达的改变 目的：通过抗霉素刺激NRK-52E细胞模拟体外缺血再灌注损伤过程，观察缺血再灌注损伤时NRK-52E中TLR-4基因mRNA表达的变化。 方法：依据文献所载的方法，将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞株... 展开 第一节NRK-52E缺血再灌注损伤时TLR-4基因mRNA表达的改变 目的：通过抗霉素刺激NRK-52E细胞模拟体外缺血再灌注损伤过程，观察缺血再灌注损伤时NRK-52E中TLR-4基因mRNA表达的变化。 方法：依据文献所载的方法，将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)予去除培养基后，经10-10mol/L抗霉素(Antimycin A，AA)[14]刺激一小时后再加入培基，模拟缺血再灌注损伤过程[15]。在刺激前，刺激后一小时整，加入培基再灌注10min，30min，60min，120min六个时间点分组，分别在不同的时间点终止实验。用流式细胞仪以Annexin V，PI染色检测各组细胞凋亡情况；用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)观察各组细胞TLR-4，Bax及Bcl-2基因mRNA表达水平。 结果： NRK细胞经抗霉素A刺激一小时模拟IR损伤后，与刺激前NRK细胞相比较，其TLR-4基因mRNA表达增强(P＜0.05)，细胞凋亡率显著增高(P＜0.01)，前凋亡基因Bax mRNA表达减弱，抑凋亡基因Bax mRNA表达增强，(P＜0.05)；并且随着再灌注时间的延长，这些改变进一步明显。 小结经抗霉素A刺激NRK-52E细胞后恢复培基的方法能观察到明显的细胞凋亡改变，成功地模拟肾小管上皮细胞体外缺血再灌注损伤过程；而在这一过程中，TLR-4基因mRNA的表达显著增强，进一步证实TLR-4在I/R诱导损伤过程中的信号介导作用，并提示I/R损伤中TLR-4信号通路的增强可能通过某些下游因子启动细胞凋亡。 第二节虫草提取液对NRK-52E细胞缺血再灌注损伤的保护作用 目的：通过运用冬虫夏草提取液干预NRK-52E细胞达72h后再对细胞实施模拟I/R损伤过程，对比未予虫草提取液干预组，观察虫草提取液对NRK-52E细胞I/R损伤的保护作用。 方法：在成功制备抗霉素A诱导NRK-52E细胞体外缺血再灌注损伤模型的基础上。予加虫草提取液培基(40mg/L)培养NRK细胞72h后实施IRI(方法同第一节)，对比未经干预组，观察并对比两组间细胞TLR-4基因表达情况以及凋亡情况(凋亡率、Bax基因、Bcl-2基因)。 结果：对比未经虫草干预组，经干预后的NRK-52E细胞显示出较为明显的对I/R损伤的耐受性。表现为TLR-4表达的减轻(P<0.05)，以及凋亡率的减轻，Bcl-2表达的增加，Bax表达的减轻(P<0.05)。 小结冬虫夏草提取液可能具有通过减轻Bax的上调和Bcl-2的下调程度保护I/R中的NRK细胞，减轻凋亡；并可能通过减轻TLR-4的上调产生细胞保护作用。 结论： 1.经抗霉素A刺激后再恢复培养基灌注的NRK-52E细胞可产生明显的类似于缺血再灌注的乏氧性损伤，表现为细胞凋亡率增加，Bax表达上调，Bcl-2表达降低。 2.TLR-4可能参与了NRK-52E缺血再灌注损伤过程中的信号传导。 3.冬虫夏草提取液可能具有通过减轻Bax的上调和Bcl-2的下调程度保护VR中的NRK细胞，减轻凋亡；并可能通过减轻TLR-4的上调产生细胞保护作用。 收起