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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 目的:探讨氨基糖苷类抗生素对近球肾小管上皮细胞Na+,K+-ATPase活性及其表达的影响,并比较第一代氨基糖苷类抗生素庆大霉素(Garamycin GM)和新一代氨基糖苷类抗生素奈替米星(Netromycin NTM)对近球肾小管上皮细胞Na+,K+-ATPase活性及其表达影响的差... 展开 目的:探讨氨基糖苷类抗生素对近球肾小管上皮细胞Na+,K+-ATPase活性及其表达的影响,并比较第一代氨基糖苷类抗生素庆大霉素(Garamycin GM)和新一代氨基糖苷类抗生素奈替米星(Netromycin NTM)对近球肾小管上皮细胞Na+,K+-ATPase活性及其表达影响的差别。 方法:采用显微微分离法获得大鼠近球小管上皮细胞(proximal tubles epithelial cells,PTEC)并进行原代培养,以免疫细胞化学方法鉴定细胞类型。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的NTM与GM作用12h、24h及48h对PTEC增殖的影响,以确定合适的NTM与GM的实验浓度。然后分为:(1)正常对照组(NC组);(2)低浓度NTM(0.6mmol/L)与GM组(0.6mmol/L)(3)中浓度GM(1.2 mmol/L)与NTM组(1.2 mmol/L);(4)高浓度GM(1.8 mmol/L)与NTM组(1.8 mmol/L);每组设8个复孔(n=8),分别作用12h、24h、48h。液闪法测定PTEC Na+,K’-ATPase活性;实时荧光定量RT-PCR的方法测定Na+,K+-ATPase α1mRNA的表达进行相对定量分析。 结果:①培养48h后,低浓度GM组和NTM组PTEC的Na+,K+-ATPase活性及其α1亚单位mRNA的表达都分别显著低于对照组(p值都小于0.01);低、中、高GM浓度与PTEC的Na+,K+-ATPase活性呈显著负相关(r=-0.811,p<0.01),与Na+,K+-ATPase α1 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.744,p<0.01);不同NTM浓度与PTEC的Na+,K+-ATPase活性呈显著负相关(r=-0.759,p<0.01);与Na+,K+-ATPase α1mRNA的表达也呈显著负相关(r=-0.745,p<0.01)②以中浓度GM或NTM培养PTEC12h,Na+,K+-ATPase活性及其α1亚单位mRNA的表达即均显著低于对照组(p值都小于0.01);以中浓度GM培养PTEC的时间(12h,24h,48h)与PTEC Na+,K+-ATPase活性呈显著负相关(r=-0.885,p<0.01),与Na+,K+-ATPaseα1mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.944,p<0.01);以中浓度NTM培养PTEC的时间与PTEC的Na+,K+-ATPase活性呈显著负相关(r=-0.914,p<0.01),与Na+,K+-ATPase α1 mRNA的表达也呈显著负相关(r=-0.922,p<0.01);③培养48h后,对低、中、高浓度GM与NTM的PTEC进行比较,GM组的Na+,K+-ATPase活性及其α1亚单位mRNA的表达都显著低于相同浓度的NTM组;以相同的中等摩尔浓度的GM或NTM分别与PTEC培养12h,24h,48h,每一个时间点上,GM组的Na+,K+-ATPase活性及其α1亚单位mRNA的表达都显著低于NTM组。 结论:氨基糖苷类抗生素GM和NTM能够抑制肾小管上皮细胞的Na+,K+-ATPase活性及其表达;GM对肾小管上皮细胞的Na+,K+-ATPase活性和对其表达的抑制作用都强于NTM;氨基糖苷类抗生素对肾小管上皮细胞的Na+,K+-ATPase活性和对其表达的抑制作用是这类抗生素的肾脏毒理机制之一。 收起
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