摘要: 聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoate,PHA),一种由微生物合成的聚酯,由于具有生物可降解性、生物相容性、光学性、压电性、气体相隔性等许多优良性能,而有可能在众多领域,如生物降解性包装材料、组织工程材料和缓释材料等方面得到广泛应用,因此正日益... 展开 聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoate,PHA),一种由微生物合成的聚酯,由于具有生物可降解性、生物相容性、光学性、压电性、气体相隔性等许多优良性能,而有可能在众多领域,如生物降解性包装材料、组织工程材料和缓释材料等方面得到广泛应用,因此正日益引起了科研领域及工业界的广泛兴趣.该文对PHA合成过程中的关键酶-PHA合酶基因(phaC)进行了研究,旨在通过发现一些具有特殊功能的PHA合酶基因,促进新型PHA的发现.论文取得了如下研究结果:(1)建立了一种快速克隆Ⅱ型PHA合酶基因的方法.该方法通过对5种已知的假单胞菌PHA合酶基因的排列顺序及碱基序列的比较,在基因的外侧找到了一些相对保守的区域.根据这些保守区的序列设计出两条用于PCR扩增的通用引物,以细菌的基因组DNA为模板,采用特殊的PCR实验方案降落PCR(Touch-down PCR)对Ⅱ型PHA合酶基因进行了成功地克隆.该方法的特点是简单易行、重复性好且适用性强.(2)应用上面建立的克隆方法,从该实验室筛选到的四株不同PHA野生型菌株中共克隆到7个Ⅱ型PHA合酶基因.(3)应用基因敲除的方法构建了一株大肠杆菌的脂肪酸降解fadB缺失突变株KM32B(fadB::Tet).经PCR验证fadB基因已完全被四环素抗性基因(Tet)取代.(4)成功构建了含有上述Ⅱ型PHA合酶基因的表达载体,并将它们分别转入野生型大肠杆菌及脂肪酸降解fadB缺失突变株KM32B中进行表达.(5)通过对伯克霍尔德氏菌B.caryophylli YS13的研究,发现了该菌株PHA合成的另一条途径. 收起