摘要: 该篇论文介绍了我们利用大豆为实验材料,对衰老相关的蛋白激酶的磷酸化性质进行的研究以及对衰老相关的植物类受体蛋白激酶基因的克隆.运用生物化学方法,对一个可能与大豆叶片衰老及细胞分裂素延缓衰老相关的57KD钙依赖蛋白激酶(CDPK)(王宁宁,1998)进... 展开 该篇论文介绍了我们利用大豆为实验材料,对衰老相关的蛋白激酶的磷酸化性质进行的研究以及对衰老相关的植物类受体蛋白激酶基因的克隆.运用生物化学方法,对一个可能与大豆叶片衰老及细胞分裂素延缓衰老相关的57KD钙依赖蛋白激酶(CDPK)(王宁宁,1998)进行了体外磷酸化研究,证明该CDPK在体外具有非常强的自磷酸化活性;层析分析表明,其自磷酸化发生在丝氨酸和苏氨酸残基上,而在酪氨酸残基上未发生自磷酸化.利用植物类受体蛋白激酶保守序列合成兼并引物,利用RT-PCR方法从人工诱导衰老和6-BA延缓衰老以及正常条件下的大豆叶片中克隆与衰老相关的类受体蛋白激酶基因,并对其中的两个片段-RLPK3和RLPK4进行了核酸和推测的氨基酸序列分析.为了获得RLPK3和RLPK4的全长序列,使用CLONTECH设计的Race方法:以经过诱导处理、6-BA延缓衰老处理以及正常叶片的总RNA为模板反转录获得全长cDNA;根据RLPK3和RLPK4的特殊序列合成特异性引物,以cDNA为模板进行了向3'端和5'端的延伸. 收起