摘要: 本研究欲通过对遗传学同质的我国新疆哈萨克族人群的基因多态性与高血压相关环境因素的研究，对基因和环境因素交互作用在EH发病中的作用及机制进行深入地探讨，以期为预防及控制高血压、降低高血压并发症、减轻社会及经济负担提供科学依据。 材料... 展开 本研究欲通过对遗传学同质的我国新疆哈萨克族人群的基因多态性与高血压相关环境因素的研究，对基因和环境因素交互作用在EH发病中的作用及机制进行深入地探讨，以期为预防及控制高血压、降低高血压并发症、减轻社会及经济负担提供科学依据。 材料和方法： 采用流行病学与分子生物学相结合的方法。 1．流行病学调查和临床相关指标测定 本研究选择新疆塔城地区沙湾县博尔通古乡为调查现场，采用整群随机抽样方法，选择年龄20岁及以上、至少三代在当地居住的哈萨克居民为研究对象，对他们进行流行病学调查和临床检查，并采集了血样。共调查289人，均征得知情同意。调查内容包括问卷调查、血压测量、相关机体指标测量、超声诊断等排除与高血压有关的疾病。临床生化指标由Automatic analyzer 全自动生化分析仪完成。用微粒子化学发光法测定血清中叶酸水平(美国Beckman公司试剂盒)。用电化学发光法测定胰岛素(INS，德国罗氏公司试剂盒))，计算胰岛素指数(IRI，空腹血糖-胰岛素/22.5)。比色法测定一氧化氮合酶(NOS)活性(总NOS、诱导型 NOS、内皮型NOS)和一氧化氮(N0)(南京建成生物工程研究所试剂盒)。 2.多聚酶链反应(PCR)检测多态性和测序鉴定 PCR检测内皮型一氧化氮合成酶基因27bpVNTR (eNOS27bpVNTR)和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C667T多态性(MTHFR C667T)，PCR产物经2～2.5％琼脂糖凝胶电泳40min～60min，溴化乙锭染色，凝胶成像仪成像，可判定eNOS27bpV NTR的基因型。：MTHFR C667T基因用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)酶切后判定基因型。两种基因的部分PCR产物送至上海基康生物技术有限公司进行纯化并测序，结果经BLAST基因服务站进行同源性分析。 3.统计学分析 Epidata建立数据库，采用SPSS11.O统计软件包进行统计学处理。计算两组基因型频率以确认符合Hardy-weinberg平衡。由基因型频率计算等位基因频率。组间等位基因频率和基因频率比较采用x<'2>检验。两组临床指标比较采用t检验。两个数值变量间的相关性用直线相关分析。不同基因型与临床指标问的关系比较采用单因素方差分析。高血压危险因素及交互作用采用Logistic回归。P<O.05有统计学差异。 结果： 1.EH的环境易感因素 研究结果初步阐明该哈萨克族人群EH的主要危险因素为超重、腹部肥胖和蔬菜摄入偏低。按年龄、性别分层后的多因素Logistic回归分析结果显示，其中男性小于45岁，肥胖和低叶酸水平与EH的危险性增加有关，OR分别为8.670和0.125。而男性大于45岁，腹部肥胖和低叶酸与EH的危险性增加有关，OR分别为5.798和O.466；女性小于45岁，肥胖与EH的危险性增加有关，OR为9.05，而女性大于45岁，超重、肥胖和低叶酸与EH的危险性增加有关，OR分别为3.842、4.488和0.936，其它与EH的关联在a=O.05水平上，未达到显著性。高血压(EH)与正常血压组(NT)的临床相关指标比较，体质指数(BMI)、腰臀比(WHR)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)、胰岛素(INS)和胰岛素指数(IRI)均有统计学差异，各指标EH组高于NT组。但多因素logistic回归分析结果与EH无关。 EH 组和 NT 组两组叶酸、一氧化氮(N0)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮型 NOS(eNOS)比较均有显著性差异，各指标EH组低于NT组；但诱导型NOS(iNOS)两组比较无差异。多因素logistic回归分析结果显示叶酸、NOS、eNOS能降低EH发生的危险性。 叶酸与有关指标的相关分析显示，叶酸与收缩压和舒张压呈负相关 (P<0.01)；与eNOS、NO呈正相关(P<0.01)但与 iNOS不相关。叶酸与胰岛素、 IRI 亦不相关。而性别与叶酸水平有关，女性叶酸水平高于男性。 结果提示肥胖和蔬菜摄入过少是新疆哈萨克族EH的环境易感因素，控制体重，增加蔬菜的摄入，有助于预防高血压的发生。 2.eNOS27bp VNTR多态性与环境因素的交互作用 (1)eNOS 27bpVNTR基因型和等位基因频率分布符合Hardy-weinberg平衡检验，结果显示本研究人群有较好的代表性。eNOS 27bpVNTR b/b、b/a、a/a基因型频率分布，NT组分别为84.06％、15.22％、0.72％，b和a等位基因分布频率分别为91.67％、8.33％： EH组b/b、b/a、a/a基因型频率分布分别为81.46％、15.89％、2.65％，b和a等位基因分布频率分别为89.40％、10.60％，EH组和NT组相比较，基因型频率分布无差异(P>O.05)，等位基因型频率分布也无差异(P>O.05)。本研究表明本地区新疆哈萨克人群eNOS 27bpVNTR基因多态性分布特征，基因型以bb纯合子最多，其次是ab杂合子，aa基因型最少；b等位基因频率高于a等位基因频率。存在种族特异性。eNOS27hpVNTR基因多态性与新疆哈萨克族阴不相关。 (2) eNOS27bpVNTR不同基因型BMI、WHR、SBP、DBP、空腹血糖、胆固醇及叶酸等指标都比较接近，均未见差异(P>O.05)；将EH组分男、女性别不同基因型后各指标也无差异(P>0.05)。 (3) eNOS27bpVNTR基因多态性与环境易感因素年龄、性别、吸烟、饮酒、肥胖和蔬菜摄入未发现有交互作用(P>O.05)。结果提示eNOS27bpVNTR不同基因型与环境易感因素无交互作用。 3.MTHFR C677T基因多态性与环境因素的交互作用 (1) MTHFR C677T基因型和等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡检验，结果显示本研究人群有较好的代表性。对照组和高血压两组C677T三种基因型 (CC、TC、TT)的分布频率分别为65.9％、29.O％，5.11％和71.5％、23.2％，5.3％；等位基因C和T的分布频率分别为80.4％、19.6％和83.0％和16.9％。两组基因型和等位基因的频率分布无差异(P>0.05)。本研究表明本地区新疆哈萨克人群MTHFR C667T基因型分布特征两组以CC纯合子最多，其次是TC杂合子，TT基因型最少，c等位基因频率高于T等位基因频率，存在种族特异性。MTHFR C677T。基因多态性与新疆哈萨克族EH不相关。 (2) MTHFR C677T不同基因型BMI、wHR、 SBP、DBP、空腹血糖、胆固醇及叶酸等指标都比较接近，均未见差异(P>0.05)；将EH组分男、女性别后不同基因型各指标也无差异(P>0.05)。 (3) 女性叶酸水平高于男性，但不同基因型的叶酸水平无差异(p>O.05)，将EH组分男、女性别后各基因型叶酸水平无差异(p>O.05)，表明，MTHFR C677T。基因多态性不会影响叶酸水平。 (4) MTHFR C677T基因多态性与环境易感因素吸烟、饮酒、肥胖和蔬菜摄入未发现有交互作用(p>O.05)。结果提示MTHFR C677T不同基因型与环境易感因素无交互作用4.eNOS27bpVNTR和WI'HFR C677T基因的协同作用eNOS27bpVNTR 和 MTHFR C677T基因联合后各基因型的分布两组无差异 (p>0.05)；eNOS27bpVNTR 和 MTHFR C677T基因联合后不同基因型各指标的比较，两组无差异(p>0.05)，本研究未发现eNOS27bpVNTR和MTHFR C677T基因的协同作用。 结论： 1.肥胖和蔬菜摄入过少是新疆哈萨克族EH的环境易感因素，而吸烟、饮酒在本研究人群未发现是环境易感因素。 2.蔬菜摄入过少可导致叶酸水平的降低；叶酸水平男性低于女性。 3.本地区新疆哈萨克人群eNOS27bpVNTR基因多态性分布特征，基因型以bb纯合子最多，其次是ab杂合子，aa基因型最少；b等位基因频率高于a等位基因频率，存在种族特异性。eNOS27bpVNTR基因多态性与新疆哈萨克族EH不相关。 eNOS27bpVNTR基因可能不是新疆哈萨克族EH的易感基因。 4.本地区新疆哈萨克人群MTHFR C677T基因多态性分布特征，基因型以CC纯合子最多，其次是CT杂合子，TT基因型最少；C等位基因频率高于T等位基因频率，存在种族特异性。MTHFR C677T基因多态性可能与新疆哈萨克人群EH无相关。 MTHFR C677T基因可能不是新疆哈萨克族EH的易感基因。MTHFR C677T基因多态性可能不会影响叶酸水平。 5.eNOS27bpVNTR、 MTHFR C677T基因多态性与环境易感因素无交互作用。 6.未发现eNOS27bpVNTR和MTHFR C677T基因对高血压的协同作用。 7.新疆哈萨克EH的发生机制存在eNOS通路障碍，其中环境因素蔬菜摄入偏低导致的叶酸水平降低可能是主要的原因，未发现遗传因素对eNOS通路障碍的影响。 8.环境因素在新疆哈萨克EH高发的机制中可能占据重要地位。增加新疆哈萨克族居民的蔬菜摄入量对于控制其EH可能具有简便易行、而事半功倍之效。 收起