摘要 : 目的 建立一种快速、特异、灵敏的人粪便中华支睾吸虫虫卵检测方法,并对方法进行评价,为快速、准确、有效诊断人是否患有华支睾吸虫病提供依据.方法 以华支睾吸虫细胞色素c氧化酶亚基1基因为靶位点,用Primer Express 3.0软件设计引物,经Blast软件对相... 展开 目的 建立一种快速、特异、灵敏的人粪便中华支睾吸虫虫卵检测方法,并对方法进行评价,为快速、准确、有效诊断人是否患有华支睾吸虫病提供依据.方法 以华支睾吸虫细胞色素c氧化酶亚基1基因为靶位点,用Primer Express 3.0软件设计引物,经Blast软件对相似序列搜索后,筛选出一套最优与常见寄生虫无交叉反应的引物;分别用猫后睾吸虫、粪类圆线虫、日本血吸虫、细粒棘球绦虫、卫氏并殖吸虫等可感染人类、虫卵形态易混淆、种属关系较近的寄生虫的DNA进行特异性实验;将含有目的片段的阳性质粒梯度稀释后进行PCR扩增,确定检测方法的灵敏性;利用建立的方法对吉林省白城市周边人粪样品进行检测,验证方法的可行性.结果 利用细胞色素c氧化酶亚基1基因设计的引物仅对华支睾吸虫(或虫卵)DNA有扩增条带,而其他对照以及阴性对照均未有明显扩增条带,对华支睾吸虫虫卵阳性质粒DNA检测敏感性可达到2.47 × 102 copies/µl,建立的方法能够对实际粪便中的华支睾吸虫虫卵进行有效扩增,与传统图片镜检法比较二者检测结果一致.结论 PCR方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测人粪便中的华支睾吸虫虫卵,可以为华支睾吸虫病的快速诊断提供技术支持. 收起