摘要 : 目的建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法利用无糖无血清培养基结合厌氧(94%N_(2)、5%CO_(2)、1%O_(2))处理H9c2心肌细胞4 h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24 h,制备H/R损伤模... 展开 目的建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法利用无糖无血清培养基结合厌氧(94%N_(2)、5%CO_(2)、1%O_(2))处理H9c2心肌细胞4 h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24 h,制备H/R损伤模型。在造模前12 h给予圣草次苷(5、10、20μg·mL^(-1)),细胞活力及乳酸脱氢酶(LDH)检测实验中选择灯盏乙素(20μg·mL^(-1))作为阳性药,对照组及模型组给予等体积DMSO。MTT法测定细胞存活率;试剂盒检测细胞培养上清液中LDH水平;试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;TUNEL染色检测细胞凋亡;DCFH-DA和JC-1探针分别检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位改变;Western blotting检测核蛋白中转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)和总蛋白中血红素氧合酶1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)水平。结果与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞存活率明显下降,凋亡明显增加,LDH水平明显升高,细胞内MDA水平明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低,ROS释放明显增多,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,圣草次苷可剂量相关性地改善上述变化,其中10、20μg·mL^(-1)组均差异显著(P<0.01)。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞Nrf2核转位以及HO-1、GCL表达水平无显著变化;与模型组比较,圣草次苷10、20μg·mL^(-1)显著增加Nrf2核转位及HO-1、GCL表达水平(P<0.01)。结论圣草次苷能够保护H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,增加细胞内源性抗氧化能力,抑制氧化应激损伤,保护线粒体功能以阻止细胞凋亡的发生。 收起