摘要 : [目的]圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒.黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子.因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的... 展开 [目的]圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒.黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子.因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标.本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂.[方法]通过PCR扩增SLEV NS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropy1β-D-thiogalactoside)诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer)技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台.[结果]SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95％以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行.对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEV NS2B-NS3蛋白酶具有明显的抑制活性.[结论]本研究为SLEV NS2B-NS3蛋白酶抑制剂提供了一种操作方便、高通量的筛选方法,并首次发现了原花青素具有抑制SLEV NS2B-NS3蛋白酶活性的功能,可以作为治疗SLEV感染的潜在靶向药物. 收起