摘要 : 为了检测反义转染引起的细胞着丝粒蛋白CENP-B表达的变化情况, 用原核表达的融合蛋白GST-CENP-B免疫Balb/c小鼠, 制得抗CENP-B的鼠抗血清(MaCenpB). 转染了含有反义CENP-B表达载体pBI-EGFP-as-CenpB的HeLa-Tet-off细胞(HaCb), 用Northern blot和Weste... 展开 为了检测反义转染引起的细胞着丝粒蛋白CENP-B表达的变化情况, 用原核表达的融合蛋白GST-CENP-B免疫Balb/c小鼠, 制得抗CENP-B的鼠抗血清(MaCenpB). 转染了含有反义CENP-B表达载体pBI-EGFP-as-CenpB的HeLa-Tet-off细胞(HaCb), 用Northern blot和Western blot研究了转染后细胞内源CENP-B基因表达的抑制情况. 生长曲线表明, 反义CENP-B抑制HeLa(Tet-off)细胞增殖, 使倍增时间延长了32.8 h. 流式细胞光度术分析表明, 较之HeLa(Tet-off)细胞, HaCb的G1期比例增加 (DG1 = 9%), S期比例减少(ΔS = 11%). 同时, 有丝分裂指数(MI)大大降低; 间接免疫荧光分析表明, HaCb的着丝粒组装受到抑制. 这说明, CENP-B的正常表达对于细胞的增殖是必要的. 收起